| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一部分 大鼠肾细胞缺血再灌注凋亡模型的建立及验证Ppif基因在模型中的表达 | 第14-29页 |
| 摘要 | 第14-15页 |
| Abstract | 第15-16页 |
| 前言 | 第16页 |
| 1 材料与药品 | 第16页 |
| 2 实验方法 | 第16-20页 |
| ·细胞培养及体外缺血再灌注模型建立 | 第16-18页 |
| ·复制大鼠肾细胞体外缺血再灌注模型 | 第18页 |
| ·细胞形态学观察 | 第18页 |
| ·ANNECIN Ⅴ-FITC/PI荧光标记双染,流式细胞术检测细胞凋亡率 | 第18-19页 |
| ·RT-PCR法检测Ppif基因的mRNA水平 | 第19-20页 |
| ·统计学处理 | 第20页 |
| 3 结果 | 第20-22页 |
| ·细胞形态特征变化 | 第20-21页 |
| ·细胞凋亡率检测 | 第21页 |
| ·RT-PCR法测定Ppif基因 | 第21-22页 |
| 4. 讨论 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-24页 |
| 附图 | 第24-29页 |
| 第二部分 siRNA沉默Ppif基因表达对大鼠肾细胞增殖和凋亡的影响 | 第29-46页 |
| 摘要 | 第29-30页 |
| Abstract | 第30-31页 |
| 前言 | 第31页 |
| 1 材料与方法 | 第31-37页 |
| ·细胞株与主要试剂 | 第31-32页 |
| ·NRK细胞培养及NRK细胞缺氧再灌注模型的建立 | 第32页 |
| ·siRNA的设计与合成 | 第32页 |
| ·细胞培养和转染 | 第32-33页 |
| ·PpifmRNA表达的RT-PCR检测 | 第33页 |
| ·Ppif表达蛋白(CypD)表达的Western blot检测 | 第33-35页 |
| ·MTT法检测细胞增殖活性 | 第35-36页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第36-37页 |
| ·统计学处理 | 第37页 |
| 2 结果 | 第37-39页 |
| ·siRNA转染细胞条件筛选及效率的评价 | 第37页 |
| ·转染后细胞形态的改变 | 第37-38页 |
| ·Ppif siRNA对NRK细胞Ppif mRNA表达的影响 | 第38页 |
| ·Ppif siRNA对NRK细胞Ppif蛋白表达的影响 | 第38页 |
| ·Ppif siRNA对NRK细胞增殖的影响 | 第38-39页 |
| ·Ppif siRNA对NRK细胞凋亡的影响 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 附图 | 第43-46页 |
| 第三部分 介导大鼠Ppif基因沉默的慢病毒载体转移质粒的构建及鉴定 | 第46-57页 |
| 摘要 | 第46-47页 |
| Abstract | 第47-48页 |
| 前言 | 第48页 |
| 1 材料与方法 | 第48-51页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·靶向PPIF短发夹RNA(shRNA)的设计 | 第49-50页 |
| ·siRNA慢病毒表达载体转移质粒的构建及鉴定 | 第50-51页 |
| 2 结果 | 第51页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第51页 |
| ·重组质粒的测序分析 | 第51页 |
| ·阳性克隆质粒抽提 | 第51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 附图 | 第55-57页 |
| 第四部分 抑制Ppif基因的表达对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用 | 第57-68页 |
| 摘要 | 第57-58页 |
| Abstract | 第58-59页 |
| 前言 | 第59页 |
| 1. 材料与方法 | 第59-62页 |
| ·试剂 | 第59-60页 |
| ·动物及分组 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| ·肾相关功能检测指标及方法 | 第61-62页 |
| ·统计学处理 | 第62页 |
| 2 结果 | 第62-64页 |
| ·慢病毒感染大鼠肾细胞感染效率观察 | 第62-63页 |
| ·Ppif基因靶向RNAi慢病毒载体抑制Ppif基因的表达,对I/R损伤肾脏功能的影响 | 第63页 |
| ·抑制Ppif基因的表达对I/R损伤肾脏细胞凋亡的影响 | 第63页 |
| ·大鼠肾组织病理学变化 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-66页 |
| 附图 | 第66-68页 |
| PART Ⅴ Knockdown of Cyelophilin D gene by RNAi protects rat from ischemia/reperfusion-induced renal injury | 第68-84页 |
| Abstract | 第68-69页 |
| Introduetion | 第69-70页 |
| Material and method | 第70-73页 |
| Results | 第73-74页 |
| Diseussion | 第74-75页 |
| References | 第75-77页 |
| 附图 | 第77-84页 |
| 综述 | 第84-93页 |
| 结语和展望 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-93页 |
| 附录一 本课题发表文献 | 第93页 |
