| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-27页 |
| 1 干扰素的研究概况 | 第10-19页 |
| ·干扰素的一般特征 | 第10-11页 |
| ·干扰素的命名及分类 | 第11-12页 |
| ·干扰素的作用机理 | 第12-14页 |
| ·干扰素的应用 | 第14-16页 |
| ·干扰素在人医上的应用 | 第14-16页 |
| ·干扰素在畜牧兽医上的应用 | 第16页 |
| ·鸡干扰素的研究进展 | 第16-18页 |
| ·鸡I 型干扰素 | 第17页 |
| ·鸡II 型干扰素 | 第17页 |
| ·干扰素用于治疗与预防鸡体内疾病的潜力 | 第17-18页 |
| ·问题与展望 | 第18-19页 |
| 2 杆状病毒表达系统的研究概况 | 第19-27页 |
| ·杆状病毒的结构 | 第20-21页 |
| ·启动子 | 第20页 |
| ·昆虫细胞系 | 第20-21页 |
| ·杆状病毒表达系统的基本原理 | 第21-23页 |
| ·Bac-to-Bac 系统 | 第21-23页 |
| ·杆状病毒载体表达外源基因的影响因素 | 第23页 |
| ·杆状病毒的应用 | 第23-25页 |
| ·医用诊断和治疗 | 第24页 |
| ·医用疫苗 | 第24-25页 |
| ·生物杀虫剂 | 第25页 |
| ·生物反应器 | 第25页 |
| ·杆状病毒表达系统的应用前景 | 第25-27页 |
| 引言 | 第27-28页 |
| 试验一 鸡干扰素 α,γ 基因的克隆与遗传进化分析 | 第28-38页 |
| 1 材料和方法 | 第28-32页 |
| ·供试材料 | 第28页 |
| ·试验动物 | 第28页 |
| ·菌种和质粒 | 第28页 |
| ·基因克隆相关试剂 | 第28页 |
| ·试剂盒 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·试验方法 | 第28-32页 |
| ·引物设计与合成 | 第28页 |
| ·固始鸡脾淋巴细胞总RNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·固始鸡脾淋巴细胞的提取及诱导培养 | 第29页 |
| ·细胞总RNA 的提取 | 第29页 |
| ·固始鸡IFN-α, IFN-γ全基因的RT-PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·反转录(RT) | 第30页 |
| ·PCR 扩增 | 第30页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第30页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第30-31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·挑斑 | 第31页 |
| ·质粒提取 | 第31页 |
| ·克隆鉴定 | 第31-32页 |
| ·固始鸡IFN-α, IFN-γ的基因序列分析 | 第32页 |
| 2 结果 | 第32-36页 |
| ·固始鸡IFN-α, IFN-γ全基因的RT-PCR 扩增 | 第32-33页 |
| ·固始鸡IFN-α, IFN-γ基因的克隆及鉴定 | 第33-34页 |
| ·固始鸡IFN-α, IFN-γ基因序列测定及分析 | 第34-35页 |
| ·固始鸡 IFN-α, IFN-γ 基因与其他鸡品种及不同动物的 IFN-α, IFN-γ 基因核苷酸序列同源性比较及系统进化分析 | 第35-36页 |
| 3 结论与讨论 | 第36-38页 |
| 试验二 鸡干扰素α、γ杆状病毒共表达载体的构建 | 第38-47页 |
| 1 材料与方法 | 第38-43页 |
| ·供试材料 | 第38页 |
| ·菌种和质粒 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·试剂盒 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·试验方法 | 第38-43页 |
| ·目的片段的制备 | 第38-39页 |
| ·鸡干扰素α融合蜂素信号肽基因的构建 | 第38-39页 |
| ·鸡干扰素γ融合蜂素信号肽基因的构建 | 第39页 |
| ·鸡干扰素α、γ共表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·转座载体的纯化与扩增 | 第40页 |
| ·转座载体的质粒提取 | 第40页 |
| ·转座载体质粒的酶切回收 | 第40页 |
| ·cIFN-αH 与转座载体质粒的连接 | 第40页 |
| ·重组质粒的转化和筛选 | 第40页 |
| ·重组转座载体质粒的提取 | 第40-41页 |
| ·重组转座载体质粒的PCR 和酶切鉴定 | 第41页 |
| ·cIFN-γH 与pFB-cIFN-αH 的连接，鉴定 | 第41页 |
| ·重组鸡干扰素α、γ共表达载体的序列测定 | 第41页 |
| ·重组穿梭载体的构建 | 第41-42页 |
| ·DH10Bac 感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| ·位点特异性转座 | 第42页 |
| ·重组穿梭载体的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组穿梭载体阳性克隆的筛选 | 第42页 |
| ·重组穿梭载体质粒的提取 | 第42-43页 |
| ·重组穿梭载体的PCR 鉴定 | 第43页 |
| 2 结果 | 第43-45页 |
| ·鸡干扰素α、γ融合蜂素信号肽基因成熟蛋白基因的扩增 | 第43页 |
| ·重组转座载体的鉴定 | 第43-44页 |
| ·鸡干扰素α、γ杆状病毒共表达载体的构建示意图 | 第44页 |
| ·重组穿梭载体的鉴定 | 第44-45页 |
| 3 讨论与分析 | 第45-47页 |
| 试验三 鸡干扰素α、γ在昆虫细胞中的共表达 | 第47-54页 |
| 1 材料与方法 | 第47-50页 |
| ·供试材料 | 第47页 |
| ·菌种和质粒 | 第47页 |
| ·细胞与培养基 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·试剂盒 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·试验方法 | 第47-50页 |
| ·重组杆状病毒的获得及PCR 鉴定 | 第47-48页 |
| ·转染Sf-9 昆虫细胞获得P1 代病毒 | 第47-48页 |
| ·P2 代及P3 代重组病毒的扩增 | 第48页 |
| ·重组杆状病毒DNA 的提取与PCR 鉴定 | 第48页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE 电泳 | 第48-49页 |
| ·实时荧光PCR 分析RNA 水平上的表达 | 第49-50页 |
| ·引物设计与合成 | 第49页 |
| ·细胞总RNA 的提取 | 第49-50页 |
| ·反转录(RT) | 第50页 |
| ·实时定量PCR 检测方法的建立 | 第50页 |
| ·数据分析 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-53页 |
| ·转染后细胞形态学变化与PCR 检测 | 第50-52页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 检测 | 第52页 |
| ·实时荧光PCR 分析RNA 水平上的表达 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-54页 |
| 全文总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| Abstract | 第60-62页 |
| 发表论文 | 第62页 |
