| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第1章 综述 | 第12-46页 |
| 1.1 乳腺肿瘤干细胞研究 | 第12-33页 |
| 1.1.1 干细胞概述 | 第12-14页 |
| 1.1.2 肿瘤干细胞 | 第14-25页 |
| 1.1.3 乳腺肿瘤干细胞 | 第25-33页 |
| 1.2 PGC-1β研究 | 第33-40页 |
| 1.2.1 PGC-1基因家族 | 第33-34页 |
| 1.2.2 PGC-1家族的表达 | 第34-37页 |
| 1.2.3 PGC-1家族成员间的相互作用 | 第37页 |
| 1.2.4 PGC-1β的生理功能 | 第37-40页 |
| 1.3 mTORC信号通路与凋亡 | 第40-46页 |
| 1.3.1 mTORC概述 | 第40-41页 |
| 1.3.2 mTORC信号通路与肿瘤 | 第41-43页 |
| 1.3.3 mTOR信号通路与凋亡 | 第43-46页 |
| 第2章 乳腺肿瘤干细胞分离培养及鉴定 | 第46-64页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第46-49页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第46页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第46-47页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第47-48页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第48-49页 |
| 2.1.5 PCR引物设计与合成 | 第49页 |
| 2.2 实验方法 | 第49-53页 |
| 2.2.1 人乳腺肿瘤干细胞分离培养 | 第49-50页 |
| 2.2.2 流式细胞术检测获得乳腺肿瘤干细胞表面标记 | 第50-51页 |
| 2.2.3 MTT比色法检测乳腺肿瘤细胞生长曲线 | 第51页 |
| 2.2.4 Nanog、Sox2基因mRNA水平的检测 | 第51-53页 |
| 2.2.5 免疫荧光技术检测乳腺肿瘤细胞特异性蛋白表达 | 第53页 |
| 2.2.6 裸鼠致瘤性实验 | 第53页 |
| 2.3 实验结果 | 第53-60页 |
| 2.3.1 乳腺肿瘤干细胞的分离培养 | 第53-54页 |
| 2.3.2 流式细胞术分析鉴定 | 第54-56页 |
| 2.3.3 MTT比色法检测肿瘤干细胞生长曲线 | 第56页 |
| 2.3.4 qPCR验证Nanog、Sox2基因的表达 | 第56-57页 |
| 2.3.5 免疫荧光检测肿瘤相关抗原的表达 | 第57-58页 |
| 2.3.6 裸鼠致瘤性实验 | 第58-60页 |
| 2.4 讨论 | 第60-63页 |
| 2.5 结论 | 第63-64页 |
| 第3章 PGC-1β干扰与过表达载体构建实验研究 | 第64-78页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第64-67页 |
| 3.1.1 细胞株与菌株 | 第64页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第64-65页 |
| 3.1.3 载体与试剂 | 第65页 |
| 3.1.4 载体与试剂 | 第65-66页 |
| 3.1.5 试剂配制 | 第66-67页 |
| 3.2 实验方法 | 第67-72页 |
| 3.2.1 基因的克隆和鉴定 | 第67-71页 |
| 3.2.2 pcDNA3.1/PGC-1β真核表达载体的构建 | 第71页 |
| 3.2.3 pGenesil/shPGC-1β干扰载体的构建 | 第71-72页 |
| 3.3 实验结果 | 第72-74页 |
| 3.3.1 PGC-1β基因的克隆 | 第72-73页 |
| 3.3.2 pGEMT/PGC-1β的酶切鉴定 | 第73页 |
| 3.3.3 pGEMT/PGC-1β的测序 | 第73-74页 |
| 3.3.4 pcDNA3.1/PGC-1β真核表达载体的构建 | 第74页 |
| 3.3.5 pGenesil/shPGC-1β载体的构建 | 第74页 |
| 3.4 讨论 | 第74-76页 |
| 3.5 结论 | 第76-78页 |
| 第4章 PGC-1β经由mTOR信号通路调控乳腺肿瘤细胞凋亡的研究 | 第78-96页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第78-81页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第78-79页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第79页 |
| 4.1.3 载体与试剂 | 第79-80页 |
| 4.1.4 试剂配制 | 第80-81页 |
| 4.2 实验方法 | 第81-86页 |
| 4.2.1 肿瘤组织切片免疫组化检测 | 第81-82页 |
| 4.2.2 细胞培养 | 第82页 |
| 4.2.3 重组质粒转染及稳定克隆筛选 | 第82页 |
| 4.2.4 RNA提取与线粒体DNA定量检测 | 第82-83页 |
| 4.2.5 Western Blot分析 | 第83-84页 |
| 4.2.6 AMP与ATP测定前细胞预处理 | 第84-85页 |
| 4.2.7 高效液相色谱法测量AMP | 第85页 |
| 4.2.8 荧光检测试剂盒测量ATP | 第85页 |
| 4.2.9 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第85页 |
| 4.2.10 统计分析 | 第85-86页 |
| 4.3 结果 | 第86-93页 |
| 4.3.1 PGC-1β基因在人乳腺肿瘤组织中的表达 | 第86-87页 |
| 4.3.2 PGC-1β对细胞内线粒体DNA合成的影响 | 第87-88页 |
| 4.3.3 PGC-1β对ATP、AMP及AMPK活性的影响 | 第88-90页 |
| 4.3.4 PGC-1β对肿瘤干细胞中mTORC1/2复合物相关蛋白表达的影响 | 第90-92页 |
| 4.3.5 PGC-1β对细胞凋亡的影响 | 第92-93页 |
| 4.4 讨论 | 第93-95页 |
| 4.5 结论 | 第95-96页 |
| 第5章 结论 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-118页 |
| 附录 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 攻读博士学位期间科研成果 | 第122页 |
