| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-29页 |
| 1.1 秀丽隐杆线虫简介 | 第12-14页 |
| 1.2 线虫中的RNA干扰现象 | 第14-23页 |
| 1.2.1 线虫中的小RNA | 第14-18页 |
| 1.2.2 线虫中的细胞核内RNA干扰通路 | 第18-20页 |
| 1.2.3 线虫中RNA干扰的代际遗传 | 第20-23页 |
| 1.3 piRNA通路 | 第23-28页 |
| 1.3.1 piRNA的功能 | 第23-25页 |
| 1.3.2 piRNA的生成 | 第25-28页 |
| 1.4 本课题的目的与意义 | 第28-29页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第29-62页 |
| 2.1 线虫品系 | 第29-31页 |
| 2.2 实验相关仪器 | 第31-33页 |
| 2.3 实验相关试剂 | 第33-34页 |
| 2.4 线虫的培养、传代与杂交 | 第34-36页 |
| 2.5 线虫的冻存与复苏 | 第36-37页 |
| 2.6 线虫中的RNAi | 第37-41页 |
| 2.6.1 线虫RNA干扰菌的构建 | 第37-40页 |
| 2.6.2 线虫RNA干扰实验 | 第40-41页 |
| 2.7 线虫的显微观察 | 第41-42页 |
| 2.8 线虫的免疫荧光染色 | 第42-43页 |
| 2.9 正向遗传筛选 | 第43-44页 |
| 2.10 SNP遗传定位 | 第44-45页 |
| 2.11 线虫DNA的提取 | 第45页 |
| 2.12 线虫的显微注射 | 第45-47页 |
| 2.13 利用MosSCI技术构建转基因线虫 | 第47-50页 |
| 2.14 线虫中的染色质免疫共沉淀 | 第50-53页 |
| 2.14.1 线虫染色质免疫共沉淀实验 | 第50-53页 |
| 2.14.2 线虫染色质免疫共沉淀测序分析 | 第53页 |
| 2.15 荧光定量PCR | 第53-54页 |
| 2.16 线虫RNA的提取与处理 | 第54-56页 |
| 2.16.1 线虫RNA的提取 | 第54-55页 |
| 2.16.2 线虫RNA的处理 | 第55-56页 |
| 2.16.3 RNA测序分析 | 第56页 |
| 2.17 线虫蛋白质的提取与免疫印迹实验 | 第56-58页 |
| 2.18 线虫后代数量的统计 | 第58-59页 |
| 2.19 线虫生长速率的统计 | 第59页 |
| 2.20 利用CRISPR技术构建线虫突变体 | 第59-62页 |
| 第3章 实验结果与讨论 | 第62-96页 |
| 3.1 TOFU蛋白在线虫生殖腺细胞中的亚细胞定位 | 第62-66页 |
| 3.2 tofu-3,-4,-5参与piRNA的转录 | 第66-82页 |
| 3.2.1 tofu-3,-4,-5的缺失导致piRNA量降低 | 第66-68页 |
| 3.2.2 TOFU-3,-4,-5与PRDE-1在生殖腺细胞核内共定位 | 第68-69页 |
| 3.2.3 细胞核中TOFU-5的亚细胞定位依赖于TOFU-4和PRDE-1 | 第69-70页 |
| 3.2.4 TOFU-5结合在piRNA启动子处并依赖于TOFU-4和PRDE-1 | 第70-72页 |
| 3.2.5 TOFU-5核内定位依赖于SANT结构域和SNPC-4 | 第72-74页 |
| 3.2.6 细胞核中TOFU-4的亚细胞定位依赖于PRDE-1,TOFU-5和SNPC-4 | 第74-76页 |
| 3.2.7 TOFU-4结合在piRNA启动子处并依赖于PRDE-1 | 第76-77页 |
| 3.2.8 TOFU-4 TOFU-5,PRDE-1和SNPC-4蛋白富集在四号染色体的piRNA基因簇 | 第77-78页 |
| 3.2.9 PRDE-1, SNPC-4, TOFU-4和TOFU-5结合在Ruby motif | 第78-80页 |
| 3.2.10 SNPC-4和TOFU-5结合二类piRNA基因启动子 | 第80-82页 |
| 3.3 tofu-6参与piRNA的加工 | 第82-85页 |
| 3.3.1 tofu-6突变导致piRNA量降低 | 第82-84页 |
| 3.3.2 TOFU-6定位在生殖腺细胞质和P-Granule中 | 第84-85页 |
| 3.4 基于TOFU-5的亚细胞定位遗传筛选piRNA的调控因子 | 第85-92页 |
| 3.4.1 TBP-1参与piRNA的生成 | 第85-87页 |
| 3.4.2 MES-2,-3,-6影响TOFU-5的亚细胞定位 | 第87-88页 |
| 3.4.3 正向遗传筛选参与piRNA转录的调控基因 | 第88-92页 |
| 3.5 总结与讨论 | 第92-96页 |
| 3.5.1 piRNA的命运决定 | 第92页 |
| 3.5.2 TOFU-5和SNPC-4的其他功能 | 第92-94页 |
| 3.5.3 tbp-1基因的功能研究 | 第94页 |
| 3.5.4 组蛋白甲基化与piRNA之间的关联 | 第94-95页 |
| 3.5.5 pfd-l基因的功能研究 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第108页 |
