| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 主要英文缩略词对照表 | 第8-9页 |
| 第1章 前言 | 第9-36页 |
| 1.1 真核生物MCM复合体的组成与功能 | 第9-13页 |
| 1.1.1 MCM基因的发现 | 第10-11页 |
| 1.1.2 真核生物MCM蛋白属于AAA+蛋白家族 | 第11-13页 |
| 1.1.3 MCM复合体的解旋酶功能 | 第13页 |
| 1.2 真核生物DNA复制过程 | 第13-28页 |
| 1.2.1 DNA复制循环 | 第13-15页 |
| 1.2.2 DNA复制起始 | 第15-26页 |
| 1.2.3 DNA复制终止 | 第26-28页 |
| 1.3 单颗粒冷冻电子显微镜技术 | 第28-33页 |
| 1.3.1 单颗粒冷冻电镜技术的基本原理 | 第29-30页 |
| 1.3.2 单颗粒冷冻电镜技术的技术性突破 | 第30-33页 |
| 1.4 本课题的研究意义 | 第33-35页 |
| 1.4.1 基础生物学意义 | 第33-34页 |
| 1.4.2 应用价值 | 第34-35页 |
| 1.5 论文结构 | 第35-36页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第36-52页 |
| 2.1 实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.2 实验材料 | 第37页 |
| 2.2.1 菌株 | 第37页 |
| 2.2.2 试剂与耗材 | 第37页 |
| 2.2.3 缓冲液 | 第37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-52页 |
| 2.3.1 MCM蛋白的表达与纯化 | 第37-38页 |
| 2.3.2 质谱分析 | 第38-40页 |
| 2.3.3 铜网的亲水化处理 | 第40页 |
| 2.3.4 负染样品的制备与检查 | 第40-42页 |
| 2.3.5 碳膜的喷镀与捞取 | 第42-43页 |
| 2.3.6 冷冻样品的制备 | 第43-44页 |
| 2.3.7 冷冻样品的检查与筛选 | 第44-46页 |
| 2.3.8 冷冻样品的数据收集 | 第46-48页 |
| 2.3.9 冷冻样品的数据处理 | 第48-51页 |
| 2.3.10 原子模型的搭建 | 第51-52页 |
| 第3章 Cdt1-Mcm2-7七聚体的结构研究 | 第52-71页 |
| 3.1 Cdt1-Mcm2-7七聚体的表达与纯化 | 第52-53页 |
| 3.2 Cdt1-Mcm2-7七聚体的质谱鉴定 | 第53页 |
| 3.3 Cdt1-Mcm2-7+AMPPNP的负染样品检查 | 第53-54页 |
| 3.4 Cdt1-Mcm2-7+AMPPNP的冷冻样品数据收集和分析 | 第54-58页 |
| 3.5 Cdt1-Mcm2-7+ADP的冷冻样品数据收集和分析 | 第58-60页 |
| 3.6 Cdt1-Mcm2-7·AMPPNP和Cdt1-Mcm2-7·ADP结构的整体分析 | 第60-63页 |
| 3.7 七聚体独特的N端锌指和C端WH基序 | 第63-65页 |
| 3.8 Cdt1与Mcm2-7的相互作用 | 第65-67页 |
| 3.9 七聚体各个亚基内部构象变化 | 第67-69页 |
| 3.10 七聚体各个亚基间构象变化 | 第69-71页 |
| 第4章 Mcm2-7六聚体的结构研究 | 第71-79页 |
| 4.1 Mcm2-7六聚体的表达与纯化 | 第71-72页 |
| 4.2 Mcm2-7+AMPPNP的负染样品检查 | 第72页 |
| 4.3 Mcm2-7+AMPPNP的冷冻样品数据收集和分析 | 第72-74页 |
| 4.4 Mcm2-7+ADP+NP-40的冷冻样品数据收集和分析 | 第74-76页 |
| 4.5 Mcm2-7·AMPPNP和Mcm2-7·ADP复合物结构的整体分析 | 第76-79页 |
| 第5章 七聚体和六聚体结构的对比研究与讨论 | 第79-89页 |
| 5.1 七聚体和六聚体的结构比较 | 第79页 |
| 5.2 MCM六聚体依赖于核苷酸的构象变化 | 第79-80页 |
| 5.3 MCM2-7六聚体本质上是打开的螺旋环 | 第80-82页 |
| 5.4 阻止成熟前装载的保护机制 | 第82-83页 |
| 5.5 Cdt1的结构和功能 | 第83-85页 |
| 5.6 MCM六聚体本质上是开环螺旋结构的意义 | 第85-89页 |
| 第6章 总结与展望 | 第89-94页 |
| 6.1 论文总结 | 第89-90页 |
| 6.2 论文展望 | 第90-94页 |
| 6.2.1 对DNA复制起始过程研究的展望 | 第90-92页 |
| 6.2.2 对冷冻电镜单颗粒三维重构方法的展望 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-107页 |
| 致谢 | 第107-110页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第110页 |
