| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩写表 | 第8-14页 |
| 第一部分 拟南芥ADF5响应干旱胁迫的机制研究 | 第14-68页 |
| 一 文献综述 | 第14-30页 |
| 1.1 ABA对植物生长发育的影响 | 第14-19页 |
| 1.1.1 ABA受体PYR/PYL/RCAR的简介 | 第15-16页 |
| 1.1.2 ABA信号的磷酸化调控作用 | 第16-17页 |
| 1.1.3 ABA信号的转录调控 | 第17-19页 |
| 1.1.4 ABA调控植物抗旱的机制 | 第19页 |
| 1.2 ABA调控气孔关闭应对干旱胁迫的机制 | 第19-23页 |
| 1.2.1 植物气孔的结构和功能 | 第19-20页 |
| 1.2.2 离子通道调节气孔开闭的机制 | 第20-22页 |
| 1.2.3 转录因子介导气孔开闭的机制 | 第22-23页 |
| 1.3 植物微丝骨架的功能 | 第23-28页 |
| 1.3.1 微丝骨架的结构和作用 | 第23-25页 |
| 1.3.2 微丝骨架调节气孔开闭的机制 | 第25-26页 |
| 1.3.3 植物微丝解聚因子(ADF)的功能 | 第26-28页 |
| 1.4 ADF5功能研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| 1.5 研究技术路线图 | 第29-30页 |
| 二 材料与方法 | 第30-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 2.1.1 动植物材料 | 第30页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第30页 |
| 2.1.3 药品和试剂 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-37页 |
| 2.2.1 拟南芥组织总RNA提取 | 第31页 |
| 2.2.2 反转录 | 第31页 |
| 2.2.3 DNA提取 | 第31页 |
| 2.2.4 载体构建相关 | 第31页 |
| 2.2.5 目的片段的PCR扩增 | 第31页 |
| 2.2.6 DNA片段回收 | 第31页 |
| 2.2.7 目的片段与载体连接 | 第31页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态制备及质粒转化 | 第31页 |
| 2.2.9 大肠杆菌质粒提取 | 第31页 |
| 2.2.10 构建的重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.11 植物总蛋白提取 | 第32页 |
| 2.2.12 Westernbloting | 第32页 |
| 2.2.13 染色质免疫共沉淀分析 | 第32-35页 |
| 2.2.14 转录激活分析 | 第35页 |
| 2.2.15 酵母单杂交分析 | 第35-36页 |
| 2.2.16 离体叶片失水分析 | 第36页 |
| 2.2.17 干旱分析 | 第36页 |
| 2.2.18 ABA诱导处理 | 第36页 |
| 2.2.19 气孔开度分析 | 第36页 |
| 2.2.20 离子渗透率测定 | 第36-37页 |
| 2.2.21 叶绿素含量测定 | 第37页 |
| 2.2.22 保卫细胞内微丝骨架观察 | 第37页 |
| 2.2.23 图像和数据处理 | 第37页 |
| 2.3 实验中所用的引物信息 | 第37-40页 |
| 三 结果与讨论 | 第40-68页 |
| 3.1 ADF5的生物信息学分析 | 第40-41页 |
| 3.2 ADF5的表达受到ABA诱导 | 第41页 |
| 3.3 adf5突变体在种子萌发和子叶绿化过程中对外源ABA不敏感 | 第41-43页 |
| 3.4 ADF9不参与ABA调控的种子萌发和子叶绿化 | 第43-45页 |
| 3.5 adf5突变体气孔的闭合对ABA不敏感 | 第45-47页 |
| 3.6 adf5突变体体外失水更快 | 第47-48页 |
| 3.7 adf5突变体对干旱更加敏感 | 第48-51页 |
| 3.8 ADF5受到干旱诱导上调表达,adf5突变体在干旱诱导时气孔不能正常关闭 | 第51-52页 |
| 3.9 干旱胁迫条件下植物体内叶绿素含量变化的比较 | 第52-53页 |
| 3.10 ADF5通过影响保卫细胞内微丝排布的转换来调控气孔的闭合 | 第53-55页 |
| 3.11 ADF5启动子顺式作用元件的分析 | 第55-56页 |
| 3.12 转录因子DPBF3调控ADF5的表达 | 第56-58页 |
| 3.13 酵母单杂交证明DPBF3可以与ADF5启动子结合 | 第58-59页 |
| 3.14 转录激活分析证明DPBF3可以激活ADF5启动子的活性 | 第59-60页 |
| 3.15 染色质免疫共沉淀(ChIP)分析 | 第60-62页 |
| 3.16 dpbf3突变体表型分析 | 第62-64页 |
| 3.17 讨论与展望 | 第64-67页 |
| 3.17.1 拟南芥ADFs分化出特异的第三亚家族,且内部还发生功能分化 | 第64-65页 |
| 3.17.2 在保卫细胞内是否还存在其它成束蛋白与ADF5形成功能冗余 | 第65-66页 |
| 3.17.3 DPBF3功能冗余性分析及其它可能的转录因子参与调控ADF5的表达 | 第66页 |
| 3.17.4 ADF5介导的种子萌发和气孔闭合是否还受到其它调控 | 第66-67页 |
| 3.17.5 干旱诱导ADF5上调表达的可能机制分析 | 第67页 |
| 3.18 结论 | 第67-68页 |
| 第二部分 凝溶胶蛋白超家族G3区的功能研究 | 第68-96页 |
| 一 文献综述 | 第68-73页 |
| 1.1 Villin/gelsolin/fragmin超家族的简介 | 第68页 |
| 1.2 植物中Villin/gelsolin/fragmin超家族蛋白的研究 | 第68-69页 |
| 1.3 Villin/gelsolin/fragmin超家族各Gdomain的功能研究 | 第69-71页 |
| 1.4 G3区功能研究的目的与意义 | 第71-72页 |
| 1.5 研究技术路线图 | 第72-73页 |
| 二 材料与方法 | 第73-78页 |
| 2.1 实验材料 | 第73页 |
| 2.1.1 载体和菌株 | 第73页 |
| 2.1.2 药品和试剂 | 第73页 |
| 2.2 实验方法 | 第73-77页 |
| 2.2.1 RNA提取及反转录 | 第73页 |
| 2.2.2 载体构建相关 | 第73页 |
| 2.2.3 重组蛋白的纯化 | 第73页 |
| 2.2.4 丙酮粉制备 | 第73页 |
| 2.2.5 肌动蛋白纯化 | 第73-74页 |
| 2.2.6 肌动蛋白pyrene标记 | 第74-75页 |
| 2.2.7 profilin的纯化 | 第75页 |
| 2.2.8 蛋白质浓度测定 | 第75页 |
| 2.2.9 肌动蛋白的聚合 | 第75页 |
| 2.2.10 临界浓度测定 | 第75页 |
| 2.2.11 高速共沉淀 | 第75-76页 |
| 2.2.12 荧光显微镜直接观察微丝 | 第76页 |
| 2.2.13 微丝稀释解聚 | 第76页 |
| 2.2.14 微丝延伸测定 | 第76页 |
| 2.2.15 肌动蛋白成核分析 | 第76-77页 |
| 2.2.16 微丝剪切分析 | 第77页 |
| 2.2.17 图像和数据处理 | 第77页 |
| 2.3 实验中所用的引物信息 | 第77-78页 |
| 三 结果与讨论 | 第78-96页 |
| 3.1 ABP135_(G1-G3)和ABP29截短蛋白的制备 | 第78-79页 |
| 3.2高速共沉淀证明高浓度Ca~(2+)条件下,ABP135_(G1-G3)的微丝剪切/解聚活性明显强于ABP29 | 第79-81页 |
| 3.3荧光显微观察证明高浓度Ca~(2+)条件下,ABP135_(G1-G3)的微丝剪切/解聚活性明显强于ABP29 | 第81-82页 |
| 3.4 微丝剪切分析证明ABP135_(G1-G3)具有微丝剪切活性 | 第82-83页 |
| 3.5 在高浓度Ca~(2+)条件下,ABP135_(G1-G3)比ABP29具有更强的肌动蛋白成核能力 | 第83-85页 |
| 3.6在低浓度Ca~(2+)条件下,ABP29封闭微丝正端能力强于ABP135_(G1-G3) | 第85-87页 |
| 3.7 ABP135_(G1-G3)促进稀释介导的微丝解聚 | 第87-89页 |
| 3.8 稀释解聚过程中,ABP29稳定微丝抑制其解聚的功能分析 | 第89-91页 |
| 3.9 讨论与展望 | 第91-95页 |
| 3.10 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-113页 |
| 在学期间的研究成果 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
