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当归多糖改善炎症性贫血和肾性贫血的作用及机制研究

摘要第13-19页
ABSTRACT第19-26页
前言第28-32页
    1.课题来源第28页
    2.论文研究背景及立题第28-30页
    3.相关国内外研究概述第30-32页
第一部分 当归多糖体外抑制hepcidin表达的研究第32-70页
    1.引言第32-34页
    2.当归多糖的分离、纯化与鉴定第34-39页
        2.1 实验材料第34-35页
            2.1.1 实验试剂第34页
            2.1.2 实验仪器第34-35页
        2.2 实验方法第35-36页
            2.2.1 当归多糖的分离、纯化第35页
            2.2.2 当归多糖糖含量测定第35页
            2.2.3 紫外光谱扫描第35-36页
            2.2.4 分子量测定第36页
            2.2.5 红外波谱分析第36页
        2.3 实验结果第36-39页
            2.3.1 当归多糖的制备结果第36-37页
            2.3.2 当归多糖的紫外扫描结果第37页
            2.3.3 当归多糖的分子量测定结果第37-38页
            2.3.4 当归多糖的傅里叶红外光谱分析结果第38-39页
    3.当归多糖对IL-6诱导HepG2细胞hepcidin表达的影响第39-53页
        3.1 实验材料第39-42页
            3.1.1 细胞第39页
            3.1.2 实验试剂第39-41页
            3.1.3 引物设计第41页
            3.1.4 实验仪器第41-42页
        3.2 实验方法第42-49页
            3.2.1 HepG2细胞培养及传代第42页
            3.2.2 细胞处理第42-44页
            3.2.3 实时荧光定量PCR检测hepcidinmRNA水平第44-45页
            3.2.4 Westernblot检测p-STAT3、STAT3蛋白表达水平第45-48页
            3.2.5 免疫荧光检测p-STAT3入核情况第48-49页
            3.2.6 数据处理第49页
        3.3 实验结果第49-53页
            3.3.1 当归多糖对IL-6诱导HepG2细胞STAT3磷酸化及入核的影响第49-51页
            3.3.2 当归多糖对IL-6诱导HepG2细胞hepcidinmRNA的影响第51页
            3.3.3 当归多糖在加入JAK2抑制剂AZD1480情况下对IL-6诱导HepG2细胞hepcidin表达的影响第51-53页
    4.当归多糖对BMP6诱导HepG2细胞hepcidin表达的影响第53-59页
        4.1 实验材料第53-55页
            4.1.1 细胞第53页
            4.1.2 实验试剂第53-54页
            4.1.3 引物设计第54页
            4.1.4 实验仪器第54-55页
        4.2 实验方法第55-57页
            4.2.1 HepG2细胞培养及传代第55页
            4.2.2 细胞处理第55-56页
            4.2.3 实时荧光定量PCR检测hepcidinmRNA表达第56页
            4.2.4 Westernblot检测相关蛋白表达第56页
            4.2.5 数据处理第56-57页
        4.3 实验结果第57-59页
    5.当归多糖对LPS诱导HepG2细胞hepcidin表达的影响第59-66页
        5.1 实验材料第59-61页
            5.1.1 细胞第59页
            5.1.2 实验试剂第59-60页
            5.1.3 引物设计第60页
            5.1.4 实验仪器第60-61页
        5.2 实验方法第61-64页
            5.2.1 HepG2细胞培养及传代第61页
            5.2.2 细胞处理第61-62页
            5.2.3 实时荧光定量PCR检测hepcidinmRNA表达第62页
            5.2.4 Westernblot检测相关蛋白表达第62-63页
            5.2.5 酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液IL-6水平第63页
            5.2.6 数据处理第63-64页
        5.3 实验结果第64-66页
            5.3.1 当归多糖对LPS诱导HepG2细胞hepcidin表达的影响第64页
            5.3.2 当归多糖对LPS诱导HepG2细胞炎性反应的影响第64-66页
    6.讨论与结论第66-70页
        6.1 当归多糖的分离、纯化与鉴定第66-67页
        6.2 当归多糖对IL-6诱导HepG2细胞hepcidin表达的影响第67页
        6.3 当归多糖对BMP6诱导HepG2细胞hepcidin表达的影响第67-68页
        6.4 当归多糖对LPS诱导HepG2细胞hepcidin表达的影响第68-69页
        6.5 研究小结第69-70页
第二部分 当归多糖改善炎症性贫血的体内研究第70-98页
    1.引言第70-71页
    2.弗氏完全佐剂诱导大鼠慢性病贫血(ACD)模型的建立第71-76页
        2.1 实验材料第71-72页
            2.1.1 实验动物及饲料第71页
            2.1.2 实验试剂第71页
            2.1.3 实验仪器第71-72页
        2.2 实验方法第72-74页
            2.2.1 实验动物饲养及分组第72页
            2.2.2 模型建立及给药方案第72-73页
            2.2.3 血液标本留存第73页
            2.2.4 脏器标本留存第73-74页
        2.3 实验结果第74-76页
            2.3.1 大鼠造模前后外观形态变化第74-75页
            2.3.2 各组大鼠造模前后体重变化第75-76页
    3.当归多糖改善ACD大鼠贫血的药效学研究第76-85页
        3.1 实验材料第76-77页
            3.1.1 实验试剂第76页
            3.1.2 实验仪器第76-77页
        3.2 实验方法第77-78页
            3.2.1 血常规检测第77页
            3.2.2 ELISA检测大鼠血清hepcidin/TNF-?/IL-6/ferritin水平第77页
            3.2.3 原子吸收光谱法检测血清铁及脾脏铁含量第77页
            3.2.4 脾脏组织普鲁士蓝染色第77-78页
            3.2.5 数据处理第78页
        3.3 实验结果第78-85页
            3.3.1 当归多糖对ACD大鼠血常规的影响第78-80页
            3.3.2 当归多糖对ACD大鼠铁代谢的影响第80-82页
            3.3.3 当归多糖对ACD大鼠hepcidin水平的影响第82-83页
            3.3.4 当归多糖对ACD大鼠血清炎性因子的影响第83-84页
            3.3.5 当归多糖对ACD大鼠血清EPO水平的影响第84-85页
    4.当归多糖改善ACD大鼠贫血的机制研究第85-92页
        4.1 实验材料第85-87页
            4.1.1 实验试剂第85-86页
            4.1.2 实验仪器第86-87页
        4.2 实验方法第87页
            4.2.1 Westernblot检测相关信号蛋白的表达水平第87页
            4.2.2 数据处理第87页
        4.3 实验结果第87-92页
            4.3.1 当归多糖对ACD大鼠IL-6/STAT3信号通路的影响第87-88页
            4.3.2 当归多糖对ACD大鼠BMP/SMAD信号通路的影响第88-90页
            4.3.3 当归多糖对ACD大鼠ferroportin及ferritin表达的影响第90页
            4.3.4 当归多糖对ACD大鼠NF-?B信号通路的影响第90-92页
    5.讨论与结论第92-98页
        5.1 弗氏完全佐剂诱导大鼠慢性病贫血(ACD)模型的建立第92-93页
        5.2 当归多糖改善ACD大鼠贫血的药效学研究第93-95页
        5.3 当归多糖改善ACD大鼠贫血的机制研究第95-96页
        5.4 研究小结第96-98页
第三部分 当归多糖体外上调EPO表达的研究第98-120页
    1.引言第98-99页
    2.当归多糖对缺氧诱导Hep3B细胞EPO表达的影响第99-107页
        2.1 实验材料第99-102页
            2.1.1 细胞第99页
            2.1.2 实验试剂第99-100页
            2.1.3 引物设计第100-101页
            2.1.4 实验仪器第101-102页
        2.2 实验方法第102-104页
            2.2.1 Hep3B细胞培养及传代第102页
            2.2.2 细胞处理第102-103页
            2.2.3 Westernblot检测Hep3B细胞HIF-1/2?蛋白表达第103页
            2.2.4 实时荧光定量PCR检测Hep3B细胞EPOmRNA、HIF-1/2?mRA表达第103页
            2.2.5 数据处理第103-104页
        2.3 实验结果第104-107页
            2.3.1 当归多糖对CoCl2诱导Hep3B细胞HIF-1/2?蛋白表达的影响第104-105页
            2.3.2 当归多糖对CoCl2诱导Hep3B细胞EPOmRNA的影响第105页
            2.3.3 当归多糖对CoCl2诱导Hep3B细胞HIF-1/2αmRNA的影响第105-106页
            2.3.4 当归多糖对CoCl2诱导Hep3B细胞HIF-1/2α蛋白半衰期的影响第106-107页
    3.当归多糖对炎性因子抑制Hep3B细胞EPO表达的影响第107-117页
        3.1 实验材料第107-110页
            3.1.1 细胞第107页
            3.1.2 实验试剂第107-109页
            3.1.3 引物设计第109页
            3.1.4 实验仪器第109-110页
        3.2 实验方法第110-112页
            3.2.1 炎性因子诱导Hep3B细胞模型的建立及给药处理第110-111页
            3.2.2 免疫荧光法检测Hep3B细胞NF-?B的入核情况第111页
            3.2.3 Westernblot检测Hep3B细胞GATA2、NF-?B蛋白表达第111页
            3.2.4 实时荧光定量PCR检测Hep3B细胞EPOmRNA表达第111页
            3.2.5 数据处理第111-112页
        3.3 实验结果第112-117页
            3.3.1 当归多糖对TNF-α诱导Hep3B细胞GATA2、NF-?B表达的影响第112页
            3.3.2 当归多糖对TNF-α抑制Hep3B细胞EPO的表达的影响第112页
            3.3.3 当归多糖对IL-1β诱导Hep3B细胞GATA2、NF-kB表达的影响第112-114页
            3.3.4 当归多糖对IL-1β抑制Hep3B细胞EPO表达的影响第114-115页
            3.3.5 当归多糖对TNF-α在缺氧条件下诱导Hep3B细胞GATA2、NF-kB表达的影响第115-116页
            3.3.6 当归多糖对TNF-α在缺氧条件下抑制Hep3B细胞EPOmRNA表达的影响第116-117页
    4.讨论与结论第117-120页
        4.1 当归多糖对缺氧诱导Hep3B细胞EPO表达的影响第117-118页
        4.2 当归多糖对炎性因子抑制Hep3B细胞EPO表达的影响第118-119页
        4.3 研究小结第119-120页
第四部分 当归多糖改善肾性贫血的体内研究第120-161页
    1.引言第120-121页
    2.腺嘌呤诱导大鼠慢性肾脏病(CKD)贫血模型的建立第121-126页
        2.1 实验材料第121-122页
            2.1.1 动物第121页
            2.1.2 实验试剂第121页
            2.1.3 实验仪器第121-122页
        2.2 实验方法第122-124页
            2.2.1 实验动物饲养及分组第122页
            2.2.2 模型建立及给药方案第122-123页
            2.2.3 血液标本留存第123页
            2.2.4 脏器标本留存第123-124页
        2.3 实验结果第124-126页
            2.3.1 各组大鼠肾组织外观形态变化第124页
            2.3.2 各组大鼠肾指数、脾指数变化第124-126页
    3.当归多糖改善CKD大鼠贫血的药效学研究第126-137页
        3.1 实验材料第126-127页
            3.1.1 实验试剂第126页
            3.1.2 引物设计第126-127页
            3.1.3 实验仪器第127页
        3.2 实验方法第127-129页
            3.2.1 血清尿素氮(BUN)检测第127页
            3.2.2 血清肌酐(Scr)检测第127-129页
            3.2.3 血常规检测第129页
            3.2.4 实时荧光定量PCR检测大鼠肝脏hepcidinmRNA及肾脏、脾脏IL-6、TNF-?和IL-1?mRNA水平第129页
            3.2.5 原子吸收光谱法检测肝脏铁、脾脏铁和血清铁含量第129页
            3.2.6 ELISA检测血清EPO水平第129页
            3.2.7 数据处理第129页
        3.3 实验结果第129-137页
            3.3.1 当归多糖对CKD大鼠肾功能的影响第129-131页
            3.3.2 当归多糖对CKD大鼠血常规指标的影响第131-132页
            3.3.3 当归多糖对CKD大鼠炎症反应的影响第132-134页
            3.3.4 当归多糖对CKD大鼠铁代谢的影响第134-135页
            3.3.5 当归多糖对CKD大鼠EPO水平的影响第135-136页
            3.3.6 当归多糖对CKD大鼠hepcidin表达的影响第136-137页
    4.当归多糖改善CKD大鼠贫血的机制研究第137-151页
        4.1 实验材料第137-140页
            4.1.1 实验试剂第137-139页
            4.1.2 引物设计第139页
            4.1.3 实验仪器第139-140页
        4.2 实验方法第140-142页
            4.2.1 大鼠骨髓单个核细胞的制备第140-141页
            4.2.2 Westernblot检测相关信号通路的蛋白表达第141页
            4.2.3 实时荧光定量PCR检测相关mRNA表达第141页
            4.2.4 数据处理第141-142页
        4.3 实验结果第142-151页
            4.3.1 当归多糖对CKD大鼠HIF信号通路的影响第142-144页
            4.3.2 当归多糖对CKD大鼠GATA2及NF-?B信号通路的影响第144-146页
            4.3.3 当归多糖对CKD大鼠骨髓单个核细胞EPOR及其下游信号转导通路的影响第146-148页
            4.3.4 当归多糖对CKD大鼠肝脏p-STAT3和p-SMAD1/5/8的影响第148-149页
            4.3.5 当归多糖对CKD大鼠铁代谢相关蛋白表达的影响第149-151页
    5.讨论与结论第151-161页
        5.1 腺嘌呤诱导大鼠慢性肾脏病(CKD)贫血模型的建立第151-152页
        5.2 当归多糖改善CKD大鼠贫血的药效学研究第152-155页
        5.3 当归多糖改善CKD大鼠贫血的机制研究第155-159页
            5.3.1 当归多糖刺激CKD大鼠内源性EPO分泌的机制研究第155-156页
            5.3.2 当归多糖激活CKD大鼠骨髓单个核细胞EPOR下游信号转导通路的研究第156-158页
            5.3.3 当归多糖提高CKD大鼠循环铁利用率的机制研究第158-159页
        5.4 研究小结第159-161页
总结与展望第161-165页
参考文献第165-178页
综述第178-196页
    参考文献第188-196页
致谢第196-197页
附录1 攻读学位期间发表论文目录第197-198页
附录2 中英文缩略词对照表第198-201页
附录3 动物合格证第201-203页

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