罗非鱼海豚链球菌疫苗研制及胞外产物特性分析
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 1 前言 | 第13-21页 |
| ·鱼类链球菌病概述 | 第13-15页 |
| ·鱼类链球菌病主要病原 | 第13页 |
| ·链球菌危害的主要鱼类 | 第13页 |
| ·链球菌引起的病理现象 | 第13页 |
| ·鱼类链球菌病的流行病学 | 第13-14页 |
| ·预防与治疗 | 第14-15页 |
| ·海豚链球菌研究进展 | 第15-20页 |
| ·分类及生化性质 | 第15页 |
| ·分子生物鉴定 | 第15-16页 |
| ·病理学 | 第16页 |
| ·致病机理 | 第16-19页 |
| ·预防与治疗 | 第19-20页 |
| ·研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 罗非鱼病原菌的分离、纯化及致病性分析 | 第21-28页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·主要仪器和设备 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·溶液配制 | 第21页 |
| ·实验用鱼 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-24页 |
| ·菌株分离以及扩大培养 | 第22页 |
| ·Biolog 鉴定系统的鉴定 | 第22-23页 |
| ·细菌分子鉴定 | 第23-24页 |
| ·分离菌对罗非鱼的致病性分析 | 第24页 |
| ·药物敏感性试验 | 第24页 |
| ·结果与分析 | 第24-26页 |
| ·患病鱼细菌的分离 | 第24页 |
| ·病原菌的Biolog 鉴定结果 | 第24-25页 |
| ·PCR 鉴定结果 | 第25页 |
| ·致病性实验结果 | 第25页 |
| ·药敏试验结果 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| 3 海豚链球菌培养的优化研究 | 第28-36页 |
| ·材料与方法 | 第28-29页 |
| ·适宜液体培养基的选择 | 第28页 |
| ·菌体浓度测定 | 第28页 |
| ·影响因素的优化 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-34页 |
| ·适宜液体培养基结果 | 第29页 |
| ·适宜温度结果 | 第29页 |
| ·适宜pH 的结果 | 第29-30页 |
| ·溶氧对该菌生长的影响 | 第30页 |
| ·酵母粉的影响 | 第30-31页 |
| ·葡萄糖的影响 | 第31页 |
| ·培养基优化的正交试验 | 第31-32页 |
| ·采用优化条件培养的海豚链球菌生长曲线 | 第32-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| ·海豚链球菌培养基的优化 | 第34页 |
| ·海豚链球菌培养条件的优化 | 第34-35页 |
| ·海豚链球菌在的生长动态 | 第35-36页 |
| 4 海豚链球菌胞外产物的理化特性及免疫原性分析 | 第36-47页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·实验动物 | 第36页 |
| ·主要试剂与溶液 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·胞外产物的制备 | 第37页 |
| ·海豚链球菌ECP 酶活性定性分析 | 第37页 |
| ·溶血性测定 | 第37-38页 |
| ·酪蛋白底物法分析ECPase | 第38页 |
| ·SDS-PAGE 分析ECP | 第38页 |
| ·双向电泳分析ECP | 第38-39页 |
| ·胞外产物对罗非鱼的毒性作用 | 第39页 |
| ·胞外产物的免疫原性分析 | 第39-40页 |
| ·western-blot | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-44页 |
| ·海豚链球菌ECP 生物活性分析 | 第40-43页 |
| ·ECP 的SDS-PAGE 和双向电泳结果 | 第43页 |
| ·ECP 的 Western-blot 结果 | 第43-44页 |
| ·胞外产物对罗非鱼的毒性 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| ·胞外产物的致病性 | 第45页 |
| ·环境条件对ECPase 的影响 | 第45页 |
| ·胞外产物的蛋白条带及免疫原性 | 第45-47页 |
| 5 海豚链球菌疫苗对罗非鱼免疫功能的影响 | 第47-56页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·实验用鱼 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·溶液配制 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-51页 |
| ·海豚链球菌的扩大培养 | 第48页 |
| ·菌株的灭活 | 第48页 |
| ·疫苗制备 | 第48-49页 |
| ·疫苗接种 | 第49页 |
| ·试验鱼的采血及血清处理 | 第49页 |
| ·疫苗对罗非鱼免疫效果 | 第49-51页 |
| ·攻毒试验 | 第51页 |
| ·统计学处理 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-54页 |
| ·灭活条件结果 | 第51页 |
| ·疫苗安全性评估 | 第51页 |
| ·疫苗对罗非鱼的免疫效果 | 第51-53页 |
| ·攻毒试验及免疫保护率结果 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| ·疫苗免疫对罗非鱼体液免疫功能的影响 | 第54页 |
| ·疫苗对罗非鱼非特异免疫功能的影响 | 第54-55页 |
| ·疫苗的免疫保护效果 | 第55-56页 |
| 总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65-66页 |
| 导师简介 | 第66页 |
