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磷脂酰肌醇PI(4,5)P2调控3T3-L1脂肪细胞GLUT4转运的研究

致谢第5-6页
摘要第6-8页
ABSTRACT第8-10页
缩略词简表 (ABBREVIATIONS)第11-14页
第一章 绪论第14-23页
    1.1 葡萄糖转运蛋白 4(GLUT4)第15-16页
        1.1.1 GLUT4的结构、分布和功能第15页
        1.1.2 胰岛素刺激GLUT4转运第15-16页
    1.2 磷脂酰肌醇(PI)第16-21页
        1.2.1 PI(4,5)P2信号调控GLUT4囊泡的转运第19-20页
        1.2.2 其他PIs信号调控GLUT4囊泡的转运第20-21页
    1.3 光遗传学技术第21-22页
    1.4 课题设计及研究意义第22页
    1.5 本章小结第22-23页
第二章 3T3-L1脂肪细胞的培养及电穿孔转染模型的建立第23-35页
    2.1 引言第23页
    2.2 实验器材第23-24页
    2.3 实验方法第24-29页
        2.3.1 试剂配制第24-26页
        2.3.2 3T3-L1细胞的培养第26-27页
        2.3.3 细胞染色第27页
        2.3.4 感受态细菌的转化,质粒DNA的扩增及抽提第27-28页
            2.3.4.1 感受态细菌的转化第27页
            2.3.4.2 挑选单克隆细菌与质粒DNA的扩增第27页
            2.3.4.3 高纯度转染级别质粒的抽提第27-28页
        2.3.5 3T3-L1脂肪细胞的电穿孔转染第28-29页
        2.3.6 活细胞TIRFM成像及图像分析第29页
    2.4 实验结果第29-31页
        2.4.1 3T3-L1细胞的培养第29-30页
        2.4.2 细胞核Hoechst 33342 染色及脂滴油红O染色第30页
        2.4.3 3T3-L1脂肪细胞的电穿孔转染第30-31页
    2.5 实验讨论第31-33页
        2.5.1 细胞的培养、分化与染色第31-32页
        2.5.2 细胞的染色第32页
        2.5.3 细胞的电穿孔转染第32-33页
    2.6 本章小结第33-35页
第三章 PI(4,5)P2瞬时光控模型的建立第35-43页
    3.1 引言第35页
    3.2 实验器材第35-37页
    3.3 实验方法第37-38页
        3.3.1 试剂配制第37页
        3.3.2 3T3-L1脂肪细胞的电穿孔转染第37页
        3.3.3 A549细胞的转染第37页
        3.3.4 活细胞TIRFM成像及图像分析第37-38页
        3.3.5 统计处理第38页
    3.4 结果与讨论第38-42页
        3.3.1 应用可调式CRY2/CIBN光遗传学元件瞬时光控 3T3-L1脂肪细胞质膜上的PI(4,5)P2第38-41页
        3.3.2 可调式CRY2/CIBN光遗传学元件在A549细胞内光刺激动态响应第41-42页
    3.5 本章小结第42-43页
第四章 磷脂酰肌醇PI(4,5)P2对 3T3-L1脂肪细胞内GLUT4调控的探究第43-65页
    4.1 引言第43页
    4.2 实验器材第43-45页
    4.3 实验方法第45-49页
        4.3.1 试剂配制第45-46页
        4.3.2 3T3-L1脂肪细胞的电穿孔转染第46页
        4.3.3 3T3-L1脂肪细胞活细胞TIRFM成像及图像分析第46页
        4.3.4 3T3-L1脂肪细胞的间接免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)第46-47页
        4.3.5 蛋白质印迹法检测P-Akt(Ser473)或P-Akt(Thr308)第47-49页
            4.3.5.1 蛋白提取第47-48页
            4.3.5.2 BCA法测定蛋白浓度第48页
            4.3.5.3 蛋白质印迹法(Western Blot)第48-49页
        4.3.6 统计处理第49页
    4.4 结果与讨论第49-64页
        4.4.1 胰岛素刺激下,PI(4,5)P2促进 3T3-L1脂肪细胞内GLUT4转运第49-52页
        4.4.2 胰岛素刺激下,PI(4,5)P2参与 3T3-L1脂肪细胞内GLUT4囊泡的融合第52-54页
        4.4.3 胰岛素刺激下,PI(4,5)P2参与 3T3-L1脂肪细胞内GLUT4囊泡的锚定第54-56页
        4.4.4 基础状态下,PI(4,5)P2参与 3T3-L1脂肪细胞内GLUT4囊泡的锚定第56-60页
        4.4.5 PI(4,5)P2对 3T3-L1脂肪细胞内Akt的Thr308和Ser473磷酸化的影响第60-64页
    4.5 本章小结第64-65页
总结与展望第65-67页
    5.1 总结第65-66页
    5.2 创新点第66页
    5.3 展望第66-67页
参考文献第67-75页
硕士期间发表的论文和专利第75页

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