| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第14-39页 |
| 1.1 肿瘤转移 | 第14-15页 |
| 1.2 循环肿瘤细胞及其检测意义 | 第15页 |
| 1.3 CTCs富集分离策略 | 第15-25页 |
| 1.3.1 基于物理学性质差异分离法 | 第15-19页 |
| 1.3.1.1 尺寸 | 第15-17页 |
| 1.3.1.2 密度 | 第17-18页 |
| 1.3.1.3 电荷 | 第18-19页 |
| 1.3.2 基于生物学性质差异分离法(亲和性分选) | 第19-25页 |
| 1.3.2.1 基于磁性纳米颗粒的亲和性分选 | 第19-20页 |
| 1.3.2.2 基于纳米结构基质的亲和性分选 | 第20-22页 |
| 1.3.2.3 基于微流装置的亲和性分选 | 第22-25页 |
| 1.4 CTCs释放策略 | 第25-28页 |
| 1.4.1 酶解 | 第25页 |
| 1.4.2 光致化学键断裂 | 第25-26页 |
| 1.4.3 电化学脱吸附 | 第26页 |
| 1.4.4 温敏材料相变 | 第26-27页 |
| 1.4.5 化学试剂诱导的基质溶解 | 第27页 |
| 1.4.6 配体竞争反应 | 第27-28页 |
| 1.5 论文选题依据、意义及研究内容 | 第28-29页 |
| 1.6 参考文献 | 第29-39页 |
| 第二章 荧光磁性纳米生物探针用于肿瘤细胞的捕获和再培养 | 第39-54页 |
| 2.1 引言 | 第39-40页 |
| 2.2 实验部分 | 第40-43页 |
| 2.2.1 试剂与仪器 | 第40页 |
| 2.2.2 溶液的配制与细胞培养 | 第40-41页 |
| 2.2.3 磁性纳米颗粒的制备 | 第41页 |
| 2.2.4 荧光磁性纳米珠的制备 | 第41-42页 |
| 2.2.5 生物素修饰表皮生长因子(EGF)的合成 | 第42页 |
| 2.2.6 EGF功能化荧光磁性纳米生物探针的制备 | 第42页 |
| 2.2.7 EGF功能化荧光磁性纳米生物探针的特异性 | 第42页 |
| 2.2.8 EGF功能化荧光磁性纳米生物探针对Hela细胞的捕获 | 第42-43页 |
| 2.2.9 材料毒性表征 | 第43页 |
| 2.2.10 磁分离的细胞活力及再培养表征 | 第43页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第43-50页 |
| 2.3.1 荧光磁性纳米珠的制备 | 第43-45页 |
| 2.3.2 荧光磁性纳米珠的表征 | 第45-46页 |
| 2.3.3 EGF功能化荧光磁性纳米生物探针的制备及表征 | 第46-47页 |
| 2.3.4 EGF功能化荧光磁性纳米生物探针用于Hela细胞的捕获 | 第47-48页 |
| 2.3.5 材料毒性表征 | 第48-49页 |
| 2.3.6 磁分离的细胞活力分析 | 第49-50页 |
| 2.4 本章小结 | 第50-51页 |
| 2.5 参考文献 | 第51-54页 |
| 第三章 可牺牲磷酸锌分形结构基底用于循环肿瘤细胞的捕获和释放 | 第54-77页 |
| 3.1 引言 | 第54-55页 |
| 3.2 实验部分 | 第55-60页 |
| 3.2.1 试剂与仪器 | 第55-56页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第56页 |
| 3.2.3 分形磷酸锌纳米结构(HZnPNS)基底的制备 | 第56-57页 |
| 3.2.4 分形磷酸锌纳米结构基底的修饰 | 第57页 |
| 3.2.5 Anti-EpCAM/HZnPNS对肿瘤细胞的特异性捕获 | 第57页 |
| 3.2.6 肿瘤细胞黏附于HZnPNS的形貌结构表征 | 第57-58页 |
| 3.2.7 细胞释放条件优化 | 第58页 |
| 3.2.8 释放肿瘤细胞的活力和培养 | 第58页 |
| 3.2.9 Anti-EpCAM/HZnPNS对血样中掺杂肿瘤细胞的捕获 | 第58-59页 |
| 3.2.10 Anti-EpCAM/HZnPNS对病人血样中CTCs的捕获 | 第59页 |
| 3.2.11 CTCs基因组甲基化分析 | 第59-60页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第60-70页 |
| 3.3.1 HZnPNS制备及表征 | 第60-62页 |
| 3.3.2 HZnPNS生物相容性表征 | 第62页 |
| 3.3.3 Anti-EpCAM/HZnPNS的构建及表征 | 第62-63页 |
| 3.3.4 Anti-EpCAM/HZnPNS对肿瘤细胞的捕获 | 第63-64页 |
| 3.3.5 Anti-EpCAM/HZnPNS对血样中掺杂肿瘤细胞的捕获 | 第64-65页 |
| 3.3.6 细胞释放条件优化及表征 | 第65-66页 |
| 3.3.7 细胞释放及活力表征 | 第66-68页 |
| 3.3.8 Anti-EpCAM/HZnPNS对癌症患者血液中CTCs检测 | 第68-69页 |
| 3.3.9 CTCs释放及基因组甲基化分析 | 第69-70页 |
| 3.4 本章小结 | 第70页 |
| 3.5 参考文献 | 第70-77页 |
| 第四章 DNA响应微流控芯片用于循环肿瘤细胞捕获与释放 | 第77-99页 |
| 4.1 引言 | 第77-78页 |
| 4.2 实验部分 | 第78-85页 |
| 4.2.1 试剂与仪器 | 第78-79页 |
| 4.2.2 芯片制作 | 第79-80页 |
| 4.2.3 芯片的修饰 | 第80-81页 |
| 4.2.4 DNA链设计及凝胶电泳 | 第81页 |
| 4.2.5 DNA响应微流控芯片的构建 | 第81页 |
| 4.2.6 细胞培养 | 第81-82页 |
| 4.2.7 细胞捕获性能研究 | 第82-83页 |
| 4.2.7.1 适配体对肿瘤细胞的特异性识别 | 第82页 |
| 4.2.7.2 杂交适配体标记肿瘤细胞与链霉亲和素的亲和作用 | 第82页 |
| 4.2.7.3 流速优化 | 第82页 |
| 4.2.7.4 芯片对肿瘤细胞的特异性捕获 | 第82-83页 |
| 4.2.8 细胞释放与活力研究 | 第83页 |
| 4.2.8.1 肿瘤细胞表面链交换分析 | 第83页 |
| 4.2.8.2 肿瘤细胞的释放 | 第83页 |
| 4.2.8.3 释放的细胞活力分析 | 第83页 |
| 4.2.9 RT-qPCR分析 | 第83-84页 |
| 4.2.10 癌症患者血液中循环肿瘤细胞的捕获与释放 | 第84-85页 |
| 4.2.10.1 杂交适配体对掺杂样品中肿瘤细胞的特异性识别 | 第84页 |
| 4.2.10.2 芯片对癌症患者血液中循环肿瘤细胞的捕获 | 第84页 |
| 4.2.10.3 循环肿瘤细胞的释放 | 第84-85页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第85-94页 |
| 4.3.1 分形结构基底整合微流控芯片的制备及表征 | 第85-86页 |
| 4.3.2 用于捕获、释放细胞DNA链的设计及表征 | 第86页 |
| 4.3.3 DNA响应微流控芯片的构建及表征 | 第86-88页 |
| 4.3.4 DNA响应微流控芯片对肿瘤细胞的捕获 | 第88-90页 |
| 4.3.5 肿瘤细胞的释放及活力表征 | 第90-91页 |
| 4.3.6 回收肿瘤细胞的PCR分析 | 第91-92页 |
| 4.3.7 DNA响应微流控芯片对循环肿瘤细胞的捕获与释放 | 第92-94页 |
| 4.4 本章小结 | 第94页 |
| 4.5 参考文献 | 第94-99页 |
| 附录: 攻读博士学位期间已发表或待发表的科研成果 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
