摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-8页 |
第一章 引言 | 第11-23页 |
1.1 低温胁迫对鱼类的影响 | 第11-12页 |
1.2 DNA甲基化 | 第12-14页 |
1.2.1 DNA甲基化的形成以及去除机制 | 第12-13页 |
1.2.2 DNA甲基化的主要功能 | 第13页 |
1.2.3 温度对脊椎动物甲基化水平的影响 | 第13-14页 |
1.3 活性氧(ROS) | 第14-16页 |
1.3.1 低温与氧化应激 | 第15-16页 |
1.4 DNA损伤 | 第16-19页 |
1.4.1 DNA损伤与活性氧 | 第17页 |
1.4.2 DNA损伤与DNA甲基化 | 第17-19页 |
1.5 运动失调毛细血管扩张突变蛋白(ATM) | 第19-22页 |
1.5.1 ROS与ATM信号通路 | 第20页 |
1.5.2 DNA甲基化与ATM信号通路 | 第20-22页 |
1.6 本研究的意义 | 第22-23页 |
第二章 材料与方法 | 第23-36页 |
2.1 引言 | 第23页 |
2.2 细胞 | 第23页 |
2.3 主要试剂与仪器 | 第23-26页 |
2.3.1 主要试剂 | 第23-25页 |
2.3.2 主要仪器 | 第25-26页 |
2.4 主要试剂配方 | 第26-27页 |
2.4.1 提基因组DNA细胞裂解液 | 第26页 |
2.4.2 Western blot现用现配试剂配方 | 第26页 |
2.4.3 其他试剂配制 | 第26-27页 |
2.5 实验方法与步骤 | 第27-36页 |
2.5.1 细胞复苏 | 第27页 |
2.5.2 细胞传代 | 第27页 |
2.5.3 细胞冻存 | 第27-28页 |
2.5.4 细胞低温处理及形态观察 | 第28页 |
2.5.5 N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理细胞 | 第28页 |
2.5.6 KU-55933处理细胞 | 第28页 |
2.5.7 细胞密度与比生长速率测定 | 第28-29页 |
2.5.8 基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
2.5.9 限制性内切酶检测DNA甲基化水平 | 第30页 |
2.5.10 Western Blot分析蛋白表达水平 | 第30-33页 |
2.5.11 5-mCDNAELISAKit检测基因组DNA甲基化水平 | 第33-36页 |
第三章 结果与讨论 | 第36-45页 |
3.1 细胞低温处理后形态变以及比生长率化 | 第36-37页 |
3.2 短期低温下基因组DNA甲基化水平上升 | 第37-39页 |
3.3 短期低温下细胞甲基化水平上升与活性氧产生相关 | 第39-41页 |
3.4 短期低温下细胞甲基化水平上升与DNA损伤修复相关 | 第41-42页 |
3.5 讨论 | 第42-45页 |
第四章 结论 | 第45-46页 |
参考文献 | 第46-54页 |
硕士期间发表的文章 | 第54-55页 |
致谢 | 第55页 |