| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第13-20页 |
| 0.1 纳豆简介 | 第13页 |
| 0.1.1 纳豆的历史 | 第13页 |
| 0.1.2 纳豆的作用与功效 | 第13页 |
| 0.2 纳豆激酶概述 | 第13-18页 |
| 0.2.1 纳豆激酶的发现 | 第13-14页 |
| 0.2.2 纳豆激酶理化性质介绍 | 第14页 |
| 0.2.3 纳豆激酶的作用原理 | 第14-15页 |
| 0.2.4 纳豆激酶酶活性检测方法 | 第15-17页 |
| 0.2.5 纳豆激酶分子生物学研究 | 第17-18页 |
| 0.3 本实验研究内容及目的 | 第18-20页 |
| 第一章 纳豆激酶的原核表达 | 第20-32页 |
| 1.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 1.1.1 实验试剂 | 第20页 |
| 1.1.2 载体与菌株 | 第20页 |
| 1.1.3 引物的设计与合成 | 第20-21页 |
| 1.1.4 溶液配制方法（详见附录A） | 第21页 |
| 1.1.5 仪器耗材（详见附录B） | 第21页 |
| 1.2 实验方法 | 第21-26页 |
| 1.2.1 反复冻融法提取纳豆激酶DNA | 第21页 |
| 1.2.2 纳豆激酶前导肽+成熟肽（NKt）、成熟肽（NKm）原核表达载体的构建 | 第21-22页 |
| 1.2.3 纳豆激酶NKt、NKm原核表达载体的构建、蛋白表达及酶活检验 | 第22-26页 |
| 1.3 结果 | 第26-31页 |
| 1.3.1 NKt、NKm片段的PCR扩增结果 | 第26-27页 |
| 1.3.2 NKt、NKm原核表达载体构建、蛋白表达、酶活检测 | 第27-31页 |
| 1.4 本章小结 | 第31-32页 |
| 第二章 分子改造提高纳豆激酶热稳定性的研究 | 第32-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第32页 |
| 2.1.2 载体与菌株 | 第32-33页 |
| 2.1.3 引物的设计与合成 | 第33页 |
| 2.1.4 溶液配制方法（详见附录A） | 第33页 |
| 2.1.5 仪器耗材（详见附录B） | 第33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 2.2.1 NKt酶原基因定点突变 | 第33-35页 |
| 2.2.2 突变体原核表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.2.3 突变体原核表达载体蛋白表达、酶活检测 | 第36页 |
| 2.2.4 表达蛋白热稳定性检测 | 第36-37页 |
| 2.3 结果 | 第37-45页 |
| 2.3.1 重叠延伸PCR扩增突变NKt片段 | 第37-38页 |
| 2.3.2 突变NKt原核表达载体的构建 | 第38-41页 |
| 2.3.3 突变NKt原核表达载体蛋白表达、酶活检测 | 第41-45页 |
| 2.3.4 突变NKt表达蛋白热稳定性检测 | 第45页 |
| 2.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 纳豆激酶的真核基因工程菌构建 | 第47-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第47页 |
| 3.1.2 载体与菌株 | 第47页 |
| 3.1.3 引物的设计与合成 | 第47-48页 |
| 3.1.4 溶液配制方法（详见附录A） | 第48页 |
| 3.1.5 仪器耗材（详见附录B） | 第48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 3.2.1 NKt真核表达载体的构建 | 第48-51页 |
| 3.2.2 NKt真核表达载体蛋白表达、酶活检测 | 第51页 |
| 3.3 结果 | 第51-54页 |
| 3.3.1 NKt片段的PCR扩增结果 | 第51-52页 |
| 3.3.2 NKt真核表达载体构建、蛋白表达、酶活检测 | 第52-54页 |
| 3.4 本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 结论与展望 | 第56-58页 |
| 4.1 结论 | 第56页 |
| 4.2 创新点 | 第56-57页 |
| 4.3 展望 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 附录A 试剂及其配置一览表 | 第62-65页 |
| 附录B 主要仪器与耗材一览表 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第66-67页 |
