| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 技术路线 | 第12-13页 |
| 第一部分 野黄芩苷抑制人结肠肿瘤干细胞体外自我更新和分化的作用研究 | 第13-27页 |
| 1 实验材料 | 第13-15页 |
| 1.1 实验细胞 | 第13页 |
| 1.2 实验药物 | 第13页 |
| 1.3 实验试剂 | 第13-14页 |
| 1.4 实验仪器 | 第14-15页 |
| 1.5 实验场地 | 第15页 |
| 1.6 统计方法 | 第15页 |
| 2 实验方法与结果 | 第15-27页 |
| 2.1 人小肠上皮细胞FHS74INT的传代培养与冻存 | 第15-16页 |
| 2.1.1 人小肠上皮细胞FHs74Int的传代培养 | 第15页 |
| 2.1.2 人小肠上皮细胞FHs74Int的冻存 | 第15-16页 |
| 2.2 HT29-CSC的分选、流式检测、传代培养 | 第16-18页 |
| 2.2.1 HT-29CSC的分选 | 第16页 |
| 2.2.2 流式细胞仪检测鉴定分选后的HT-29CSC | 第16-17页 |
| 2.2.3 HT-29CSC的传代培养 | 第17-18页 |
| 2.3 野黄芩苷对HT-29CSC活性的影响 | 第18-19页 |
| 2.4 野黄芩苷对人小肠上皮细胞FHS74INT细胞活性的影响 | 第19-20页 |
| 2.5 野黄芩苷对HT-29CSC成球能力的影响 | 第20-21页 |
| 2.6 野黄芩苷对3D培养HT-29CSC的生长形态影响 | 第21-23页 |
| 2.7 野黄芩苷对HT-29CSC的生长转化影响 | 第23-25页 |
| 2.8 野黄芩苷对HT-29CSC分化的影响 | 第25-27页 |
| 第二部分 野黄芩苷抑制人结肠肿瘤干细胞体外自我更新和分化的机制研究 | 第27-49页 |
| 1 实验材料 | 第27-30页 |
| 1.1 实验细胞 | 第27页 |
| 1.2 实验药物 | 第27页 |
| 1.3 实验试剂 | 第27-29页 |
| 1.4 实验仪器 | 第29页 |
| 1.5 实验场地 | 第29页 |
| 1.6 统计方法 | 第29-30页 |
| 2 实验方法及结果 | 第30-49页 |
| 2.1 野黄芩苷对HT-29CSC中GLI1、PTCH1、CD133、LGR5、C-MYC、KI-67、CK20、NANOG基因MRNA表达水平的影响(实时荧光定量REAL-TIMEPCR) | 第30-44页 |
| 2.1.1 实验样品的制备 | 第30页 |
| 2.1.2 RNAeasyTMAnimalTotalRNAIsolationKit提取细胞总RNA | 第30-31页 |
| 2.1.3 RNA的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.1.4 cDNA第一链的合成 | 第32-33页 |
| 2.1.5 实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-TimePCR) | 第33-41页 |
| 2.1.6 实验数据的处理 | 第41-44页 |
| 2.2 野黄芩苷对C-MYC、GLI1、LGR5蛋白表达的影响(WESTERN-BLOT) | 第44-49页 |
| 2.2.1 实验样品的制备 | 第44页 |
| 2.2.2 实验主要试剂的配制 | 第44-45页 |
| 2.2.3 SDS-PAGE胶的制备 | 第45-46页 |
| 2.2.4 蛋白上样和电泳 | 第46页 |
| 2.2.5 转膜(湿转法) | 第46页 |
| 2.2.6 封闭蛋白 | 第46页 |
| 2.2.7 孵育一抗 | 第46-47页 |
| 2.2.8 洗膜 | 第47页 |
| 2.2.9 孵育二抗 | 第47页 |
| 2.2.10 显影 | 第47页 |
| 2.2.11 实验数据的处理 | 第47-49页 |
| 第三部分 野黄芩苷抑制人结肠肿瘤干细胞体内分化成瘤的作用及其机制 | 第49-76页 |
| 1 实验材料 | 第49-52页 |
| 1.1 实验细胞 | 第49页 |
| 1.2 实验动物 | 第49页 |
| 1.3 实验药物 | 第49-50页 |
| 1.4 实验试剂 | 第50-51页 |
| 1.5 实验仪器 | 第51-52页 |
| 1.6 实验场地 | 第52页 |
| 1.7 统计方法 | 第52页 |
| 2 实验方法及结果 | 第52-76页 |
| 2.1 野黄芩苷对结肠癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响 | 第52-55页 |
| 2.1.1 结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立 | 第52-53页 |
| 2.1.2 结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型的分组、给药 | 第53页 |
| 2.1.3 观察指标和取材 | 第53页 |
| 2.1.4 实验结果 | 第53-55页 |
| 2.2 RT-PCR法检测结肠癌裸鼠移植瘤中GLI1、PTCH1、CD133、LGR5、C-MYC、KI-67、CK20、NANOG基因的表达 | 第55-68页 |
| 2.2.1 用RNAeasyTMAnimalTotalRNAIsolationKit提取总RNA | 第55-56页 |
| 2.2.2 RNA的鉴定 | 第56-57页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第57页 |
| 2.2.4 实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-TimePCR) | 第57-65页 |
| 2.2.5 实验数据的处理 | 第65-68页 |
| 2.3 WESTERN-BLOT法检测裸鼠移植瘤中C-MYC、GLI1、LGR5蛋白的表达 | 第68-71页 |
| 2.3.1 实验样品的制备 | 第68页 |
| 2.3.2 实验主要试剂的配制 | 第68页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE胶的制备 | 第68页 |
| 2.3.4 蛋白上样和电泳 | 第68页 |
| 2.3.5 转膜(湿转法) | 第68-69页 |
| 2.3.6 封闭蛋白 | 第69页 |
| 2.3.7 孵育一抗 | 第69页 |
| 2.3.8 洗膜 | 第69页 |
| 2.3.9 孵育二抗 | 第69页 |
| 2.3.10 显影 | 第69页 |
| 2.3.11 实验数据的处理 | 第69-71页 |
| 2.4 免疫组化法检测裸鼠移植瘤中CD133、C-MYC、GLI1、KI67蛋白的表达 | 第71-76页 |
| 2.4.1 实验步骤 | 第71-72页 |
| 2.4.2 实验结果 | 第72-76页 |
| 讨论 | 第76-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 问题与展望 | 第84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 文献综述 | 第91-100页 |
| 参考文献 | 第96-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果 | 第101-102页 |
