| 中文摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 第一章 材料和方法 | 第11-26页 |
| 1.1 材料 | 第11-13页 |
| 1.1.1 主要实验仪器 | 第11页 |
| 1.1.2 细胞株与病毒载体 | 第11-12页 |
| 1.1.3 抗体 | 第12页 |
| 1.1.4 其他主要试剂 | 第12-13页 |
| 1.1.5 常用液体的配置 | 第13页 |
| 1.2 方法 | 第13-26页 |
| 1.2.1 Jurkat细胞培养 | 第13-15页 |
| 1.2.1.1 细胞换液与细胞传代 | 第13-14页 |
| 1.2.1.2 细胞冻存与细胞复苏 | 第14-15页 |
| 1.2.2 Jurkat细胞病毒转染及转染效率的测定 | 第15-17页 |
| 1.2.2.1 病毒转染流程 | 第15-16页 |
| 1.2.2.2 病毒转染效率的测定 | 第16页 |
| 1.2.2.3 稳定细胞系的建立 | 第16-17页 |
| 1.2.3 激光共聚焦显微镜观察细胞内CD59与CBP的定位 | 第17页 |
| 1.2.4 透射电镜 | 第17-18页 |
| 1.2.5 实时定量PCR | 第18-21页 |
| 1.2.5.1 各细胞系总RNA的提取与纯化 | 第18-19页 |
| 1.2.5.2 cDNA的合成 | 第19页 |
| 1.2.5.3 Real-time q PCR反应 | 第19-21页 |
| 1.2.6 Western Blot | 第21-23页 |
| 1.2.6.1 总蛋白的提取 | 第21页 |
| 1.2.6.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第21-23页 |
| 1.2.6.3 转膜 | 第23页 |
| 1.2.6.4 孵育抗体及检测 | 第23页 |
| 1.2.7 功能检测 | 第23-25页 |
| 1.2.7.1 CD59单克隆抗体交联处理细胞 | 第23-24页 |
| 1.2.7.2 细胞增殖试验 | 第24页 |
| 1.2.7.3 细胞凋亡试验 | 第24-25页 |
| 1.2.8 统计学分析 | 第25-26页 |
| 第二章 结果 | 第26-42页 |
| 2.1 Jurkat细胞的培养 | 第26页 |
| 2.2 Jurkat细胞病毒转染 | 第26-30页 |
| 2.2.1 相差显微镜观察转染细胞 | 第26-27页 |
| 2.2.2 激光共聚焦显微镜观察病毒转染效率 | 第27-28页 |
| 2.2.3 激光共聚焦显微镜观察抗体作用前后CBP的定位 | 第28-29页 |
| 2.2.4 激光共聚焦显微镜观察CD59与CBP的定位及关系 | 第29-30页 |
| 2.3 电镜观察细胞内的超微结构 | 第30-31页 |
| 2.4 实时定量PCR检测T细胞信号转导基因的表达 | 第31-35页 |
| 2.4.1 CBP与抑制性酪氨酸激酶CSK基因的表达 | 第32-33页 |
| 2.4.2 TCR活化通路中重要的信号分子基因的表达 | 第33-35页 |
| 2.5 Western Blot | 第35-37页 |
| 2.5.1 抑制性酪氨酸激酶CSK与LCK的表达 | 第35-36页 |
| 2.5.2 TCR活化通路中重要的信号分子的表达 | 第36-37页 |
| 2.6 功能检测 | 第37-42页 |
| 2.6.1 CCK8检测Jurkat细胞增殖 | 第37-38页 |
| 2.6.2 流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡 | 第38-42页 |
| 2.6.2.1 流式细胞术检测细胞的物理参数 | 第38页 |
| 2.6.2.2 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第38-42页 |
| 第三章 讨论 | 第42-46页 |
| 3.1 跨膜蛋白 CBP 是在 T 淋巴细胞信号转导通路中起到抑制作用 | 第42-44页 |
| 3.2 GPI 锚固蛋白 CD59 借棕榈酰化基团与 CBP 共同调节 T 淋巴细胞信号转导 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 综述 | 第49-63页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
