| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 0 前言 | 第14-29页 |
| 0.1 褐藻胶 | 第14-16页 |
| 0.1.1 褐藻胶的来源及结构 | 第14-15页 |
| 0.1.2 褐藻胶的应用 | 第15页 |
| 0.1.3 乙酰化褐藻胶与铜绿假单胞菌生物被膜 | 第15-16页 |
| 0.1.4 褐藻胶的生物降解过程 | 第16页 |
| 0.2 褐藻胶寡糖和单糖 | 第16-20页 |
| 0.2.1 褐藻寡糖和单糖的制备 | 第16-17页 |
| 0.2.2 褐藻胶寡糖和单糖的分离纯化 | 第17-18页 |
| 0.2.3 褐藻寡糖和单糖的应用 | 第18-20页 |
| 0.3 褐藻胶裂解酶 | 第20-27页 |
| 0.3.1 褐藻胶裂解酶的来源 | 第20页 |
| 0.3.2 褐藻胶裂解酶的作用机制 | 第20-21页 |
| 0.3.3 褐藻胶裂解酶的分类 | 第21-22页 |
| 0.3.4 褐藻胶裂解酶活性检测方法 | 第22页 |
| 0.3.5 褐藻胶裂解酶的生物学功能 | 第22-23页 |
| 0.3.6 褐藻胶裂解酶的应用 | 第23-24页 |
| 0.3.7 寡褐藻胶裂解酶 | 第24-27页 |
| 0.4 本论文的研究内容 | 第27-29页 |
| 第一章 寡褐藻胶裂解酶产生菌株的筛选及鉴定 | 第29-40页 |
| 1.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 1.1.1 实验仪器 | 第29-30页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第30页 |
| 1.1.3 常用培养基 | 第30页 |
| 1.2 实验方法 | 第30-32页 |
| 1.2.1 样品采集 | 第30-31页 |
| 1.2.2 酶活力测定方法 | 第31页 |
| 1.2.3 初筛方法 | 第31页 |
| 1.2.4 复筛方法 | 第31页 |
| 1.2.5 16S rDNA 的克隆与鉴定 | 第31-32页 |
| 1.2.6 阳性克隆鉴定 | 第32页 |
| 1.2.7 16S rDNA 序列测定及分析 | 第32页 |
| 1.2.8 生物信息学分析 | 第32页 |
| 1.3 结果与讨论 | 第32-39页 |
| 1.3.1 菌株筛选结果 | 第32-33页 |
| 1.3.2 菌株种属鉴定 | 第33-39页 |
| 1.4 小结 | 第39-40页 |
| 第二章 寡褐藻胶裂解酶基因克隆及序列分析 | 第40-68页 |
| 2.1 材料与方法 | 第40-43页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第41-43页 |
| 2.2 实验结果 | 第43-66页 |
| 2.2.1 设计简并 PCR 引物 | 第43页 |
| 2.2.2 梯度 PCR 法克隆寡褐藻胶裂解酶的部分基因 | 第43-45页 |
| 2.2.3 序列测定及分析 | 第45-47页 |
| 2.2.4 扩增已知序列两端的序列 | 第47-52页 |
| 2.2.5 寡褐藻胶裂解酶基因序列较正和产物序列分析 | 第52-66页 |
| 2.3 讨论 | 第66页 |
| 2.4 小结 | 第66-68页 |
| 第三章 寡褐藻胶裂解酶 OalS6 和 OalS17 的重组表达 | 第68-93页 |
| 3.1 实验材料 | 第68-70页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第68-69页 |
| 3.1.2 试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第69-70页 |
| 3.1.3 菌株与质粒 | 第70页 |
| 3.1.4 常用培养基 | 第70页 |
| 3.1.5 引物合成 | 第70页 |
| 3.2 实验方法 | 第70-76页 |
| 3.2.1 Shewanella sp. Kz7 基因组提取 | 第70页 |
| 3.2.2 引物设计与合成 | 第70-71页 |
| 3.2.3 目的片断的 PCR 扩增 | 第71-72页 |
| 3.2.4 目的基因片段的制备 | 第72页 |
| 3.2.5 pET 载体质粒的制备 | 第72-76页 |
| 3.2.6 重组表达载体的构建 | 第76页 |
| 3.2.7 表达产物的检测 | 第76页 |
| 3.3 实验结果 | 第76-92页 |
| 3.3.1 重组表达体系的构建 | 第76-88页 |
| 3.3.1.1 oalS6 目的基因的获得 | 第76-80页 |
| 3.3.1.2 oalS17 目的基因的获得 | 第80-83页 |
| 3.3.1.3 pET 质粒载体的制备 | 第83-84页 |
| 3.3.1.4 寡褐藻胶裂解酶 OalS6 重组表达载体的构建 | 第84-87页 |
| 3.3.1.5 寡褐藻胶裂解酶 OalS17 重组表达载体的构建 | 第87-88页 |
| 3.3.2 寡褐藻胶裂解酶的重组表达 | 第88-92页 |
| 3.3.2.1 oalS6 基因在大肠杆菌中的表达以及表达产物的检测 | 第88-91页 |
| 3.3.2.2 oalS17 基因在大肠杆菌中的表达以及表达产物的检测 | 第91-92页 |
| 3.3.2.3 酶活力测定 | 第92页 |
| 3.4 讨论 | 第92页 |
| 3.5 小结 | 第92-93页 |
| 第四章 重组寡褐藻胶裂解酶分离纯化与酶学性质研究 | 第93-120页 |
| 4.1 实验材料 | 第93-94页 |
| 4.1.1 实验仪器 | 第93-94页 |
| 4.1.2 试剂盒和生化试剂 | 第94页 |
| 4.1.3 菌株与质粒 | 第94页 |
| 4.1.4 常用培养基 | 第94页 |
| 4.2 实验方法 | 第94-97页 |
| 4.2.1 亲和层析 | 第94-95页 |
| 4.2.2 重组酶纯度分析 | 第95页 |
| 4.2.3 重组蛋白质浓度及比活力测定 | 第95页 |
| 4.2.4 SDS、EDTA 及金属离子对重组酶活性的影响 | 第95页 |
| 4.2.5 重组酶的最适反应温度 | 第95-96页 |
| 4.2.6 温度对重组酶稳定性的影响 | 第96页 |
| 4.2.7 重组酶的最适 pH | 第96页 |
| 4.2.8 pH 对重组酶稳定性的影响 | 第96页 |
| 4.2.9 底物偏好性研究 | 第96页 |
| 4.2.10 最终降解产物 TLC 分析 | 第96-97页 |
| 4.2.11 重组酶 OalS6 降解方式的研究 | 第97页 |
| 4.2.12 重组酶 OalS6 降解 polyG 底物的主产物的 MS 和 NMR 波谱解析 | 第97页 |
| 4.3 实验结果 | 第97-118页 |
| 4.3.1 亲和层析 | 第97页 |
| 4.3.2 SDS-PAGE 分析 | 第97-99页 |
| 4.3.3 蛋白含量及比活力测定 | 第99-100页 |
| 4.3.4 重组酶的酶学性质研究 | 第100-118页 |
| 4.3.4.1 SDS、EDTA、金属离子对重组酶活性的影响 | 第100-102页 |
| 4.3.4.2 重组酶的最适反应温度 | 第102-103页 |
| 4.3.4.3 温度对重组酶稳定性的影响 | 第103-104页 |
| 4.3.4.4 重组酶的最适反应 pH | 第104-105页 |
| 4.3.4.5 pH 对重组酶稳定性的影响 | 第105-106页 |
| 4.3.4.6 底物偏好性的测定 | 第106-107页 |
| 4.3.4.7 重组酶对底物的最终降解产物 TLC 分析 | 第107-108页 |
| 4.3.4.8 重组酶 OalS6 降解方式的研究 | 第108-112页 |
| 4.3.4.9 重组酶 OalS6 降解 polyG 底物的主产物的 MS 和 NMR 波谱解析 | 第112-118页 |
| 4.4 讨论 | 第118-119页 |
| 4.5 小结 | 第119-120页 |
| 展望 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-125页 |
| 附录 | 第125-142页 |
| 附录1 培养基、试剂及溶液的配制 | 第125-131页 |
| 附录2 常用分子生物学实验方法 | 第131-135页 |
| 附录3 缩略词 | 第135-136页 |
| 附录4 OalS6基因及氨基酸序列 | 第136-138页 |
| 附录5 OalS17基因及氨基酸序列 | 第138-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第143-144页 |
