| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 钾离子对植物的作用 | 第10-11页 |
| 1.1.1 钾离子与植物生长发育 | 第10页 |
| 1.1.1.1 钾离子与酶的激活 | 第10页 |
| 1.1.1.2 钾离子与渗透调节 | 第10页 |
| 1.1.2 钾离子与植物耐逆 | 第10-11页 |
| 1.1.2.1 干旱胁迫 | 第10-11页 |
| 1.1.2.2 盐胁迫 | 第11页 |
| 1.2 钾离子转运蛋白 | 第11-17页 |
| 1.2.1 钾离子通道 | 第12-14页 |
| 1.2.1.1 电压门控通道 | 第13-14页 |
| 1.2.1.2 非电压门控通道 | 第14页 |
| 1.2.2 钾离子载体 | 第14-17页 |
| 1.2.2.1 KUP/HAK/KT载体 | 第14-16页 |
| 1.2.2.2 HKT家族 | 第16页 |
| 1.2.2.3 CPA家族 | 第16-17页 |
| 1.2.3 其它钾离子转运蛋白 | 第17页 |
| 1.3 钾离子转运调控的分子机理 | 第17-20页 |
| 1.3.2 异亚基四聚化 | 第17-18页 |
| 1.3.3 调节蛋白 | 第18-19页 |
| 1.3.3.1 磷酸化酶 | 第18页 |
| 1.3.3.2 激酶 | 第18页 |
| 1.3.3.3 14-3-3蛋白 | 第18-19页 |
| 1.3.3.4 β亚基 | 第19页 |
| 1.3.4 电位差、pH、离子对钾离子转运蛋白的调节 | 第19-20页 |
| 1.4 小麦中的钾离子转运蛋白 | 第20-21页 |
| 2 引言 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-31页 |
| 3.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 3.1.1 植物材料预处理 | 第22页 |
| 3.1.2 菌株 | 第22页 |
| 3.1.3 载体 | 第22页 |
| 3.1.4 工具酶及试剂盒 | 第22-23页 |
| 3.1.5 实验仪器 | 第23页 |
| 3.2 TaAKT1与TaCIPK23的克隆 | 第23-26页 |
| 3.2.1 RNA提取 | 第23页 |
| 3.2.2 反转录反应 | 第23-24页 |
| 3.2.3 引物设计 | 第24页 |
| 3.2.4 PCR反应体系及程序 | 第24页 |
| 3.2.5 PCR产物胶回收 | 第24-25页 |
| 3.2.6 克隆载体的构建 | 第25-26页 |
| 3.2.6.1 目的基因与克隆载体连接 | 第25页 |
| 3.2.6.2 感受态细胞制备 | 第25-26页 |
| 3.2.6.3 热激法转化大肠杆菌 | 第26页 |
| 3.2.6.4 阳性单克隆筛选 | 第26页 |
| 3.2.6.5 克隆载体质粒提取 | 第26页 |
| 3.2.6.6 测序 | 第26页 |
| 3.3 生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 3.4 TaAKT1的荧光定量分析 | 第27页 |
| 3.4.1 引物设计 | 第27页 |
| 3.4.2 扩增体系及程序 | 第27页 |
| 3.5 TaAKT1的酵母互补功能实验 | 第27-30页 |
| 3.5.1 酵母表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 3.5.1.1 酵母表达载体的构建所需引物设计 | 第27-28页 |
| 3.5.1.2 目的基因与表达载体连接 | 第28页 |
| 3.5.1.3 连接产物的转化及阳性克隆的鉴定 | 第28页 |
| 3.5.1.4 重组质粒的提取、双酶切检测、测序 | 第28页 |
| 3.5.2 重组质粒转化酵母及功能验证 | 第28-30页 |
| 3.5.2.1 培养基及溶液 | 第28-29页 |
| 3.5.2.2 PEG热激法转酵母 | 第29页 |
| 3.5.2.3 酵母互补功能验证 | 第29-30页 |
| 3.6 TaAKT1的调控分析 | 第30-31页 |
| 3.6.1 表达载体TaCIPK23-p414的构建 | 第30页 |
| 3.6.2 TaCIPK23-p414与TaAKT1-pYPGE15共转入酵母菌株WΔ3 | 第30页 |
| 3.6.3 调控作用功能验证 | 第30-31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-39页 |
| 4.1 TaAKT1与TaCIPK23基因的克隆 | 第31-32页 |
| 4.1.1 小麦RNA提取与cDNA检测 | 第31页 |
| 4.1.2 TaAKT1与TaCIPK23全长的克隆 | 第31-32页 |
| 4.2 TaAKT1的生物信息学分析 | 第32-34页 |
| 4.2.1 TaAKT1基本理化性质 | 第32页 |
| 4.2.2 TaAKT1蛋白的同源性比对 | 第32-33页 |
| 4.2.3 TaAKT1跨膜结构的预测 | 第33页 |
| 4.2.4 TaAKT1的功能域分析 | 第33页 |
| 4.2.5 TaAKT1与其它植物钾离子通道蛋白的进化树分析 | 第33-34页 |
| 4.3 TaAKT1的表达模式 | 第34-35页 |
| 4.4 TaAKT1功能验证 | 第35-37页 |
| 4.4.1 酵母表达载体构建 | 第35-36页 |
| 4.4.2 酵母互补功能实验 | 第36-37页 |
| 4.5 TaCIPK23对TaAKT1的调控作用 | 第37-39页 |
| 4.5.1 TaCIPK23-p414的构建 | 第37页 |
| 4.5.2 TaCIPK23对TaAKT1的调控验证 | 第37-39页 |
| 5 讨论 | 第39-42页 |
| 5.1 TaAKT1与TaCIPK23基因的克隆 | 第39页 |
| 5.2 TaAKT1的生物信息学分析 | 第39页 |
| 5.3 TaAKT1的表达模式分析 | 第39-40页 |
| 5.4 TaAKT1的功能分析 | 第40页 |
| 5.5 TaCIPK23对TaAKT1的调控作用 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-52页 |
| ABSTRACT | 第52-53页 |
