| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-21页 |
| 1.1 生物催化剂的热稳定性 | 第8-10页 |
| 1.1.1 蛋白质热稳定性的类型及常用测定方法 | 第8-9页 |
| 1.1.2 提高生物酶热稳定性的对策 | 第9-10页 |
| 1.2 预测蛋白质柔性的方法 | 第10-12页 |
| 1.2.1 分子动力学模拟 | 第10-11页 |
| 1.2.2 B-FITTER | 第11-12页 |
| 1.3 刚化柔性位点的方法 | 第12-15页 |
| 1.3.1 重跌往复饱和突变（ISM） | 第12-14页 |
| 1.3.2 结构引领的一致性突变 | 第14页 |
| 1.3.3 引入二硫键和脯氨酸 | 第14-15页 |
| 1.3.4 增加盐桥 | 第15页 |
| 1.4 荧光素酶的热稳定性 | 第15-17页 |
| 1.4.1 北美萤火虫荧光素酶 | 第15-16页 |
| 1.4.2 荧光素酶的热稳定性改造 | 第16-17页 |
| 1.5 本研究的设计思路及意义 | 第17-21页 |
| 1.5.1 RFS 策略 | 第17-19页 |
| 1.5.2 RFSP 理性设计方法 | 第19-21页 |
| 第二章 荧光素酶内柔性区域的预测及改造 | 第21-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 计算机硬件配置 | 第21页 |
| 2.1.2 分析软件 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 分子动力学模拟软件 Gromacs v4.5.5 的应用 | 第22-23页 |
| 2.2.2 计算机软件 FRODA 及 B-FITTER 的应用 | 第23-24页 |
| 2.2.3 同源建模软件 MODELLER 的应用 | 第24-25页 |
| 2.3 实验结果及讨论 | 第25-31页 |
| 2.3.1 柔性区域的预测 | 第25-28页 |
| 2.3.2 柔性区域的改造 | 第28-31页 |
| 2.4 本章小结 | 第31-33页 |
| 第三章 荧光素酶突变体的载体构建及蛋白质分离纯化 | 第33-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-36页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第33页 |
| 3.1.2 工具酶、试剂盒及主要生化试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.3 培养基及溶液的配制 | 第34-35页 |
| 3.1.4 主要实验仪器 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-42页 |
| 3.2.1 野生型萤火虫荧光素酶重组载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.2.2 荧光素酶突变体载体的构建 | 第37-40页 |
| 3.2.3 野生酶及突变酶基因的原核表达及蛋白质分离纯化 | 第40-42页 |
| 3.3 实验结果及讨论 | 第42-45页 |
| 3.3.1 野生型及突变型萤火虫荧光素酶突变载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.3.2 野生型与突变型萤火虫荧光素酶的原核表达及分离纯化 | 第43-45页 |
| 3.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 第四章 野生型与突变型荧光素酶结构及功能的研究比较 | 第46-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 4.1.1 主要实验试剂及仪器 | 第46-47页 |
| 4.1.2 溶液的配制 | 第47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 荧光素酶活性检测及动力学参数的测定 | 第47-48页 |
| 4.2.2 荧光素酶动力学稳定性的测定 | 第48页 |
| 4.2.3 荧光素酶热动力学稳定性的测定 | 第48-49页 |
| 4.2.4 荧光素酶发光光谱扫描 | 第49页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第49-59页 |
| 4.3.1 野生型和突变型荧光素酶的动力学稳定性 | 第49-52页 |
| 4.3.2 野生型及突变型荧光素酶的热动力学稳定性 | 第52-53页 |
| 4.3.3 野生型荧光素酶及最优突变型的动力学常数测定 | 第53页 |
| 4.3.4 野生型及突变型荧光素酶的发光光谱扫描 | 第53-54页 |
| 4.3.5 突变型荧光素酶分子水平的构象变化 | 第54-59页 |
| 4.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 第五章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 5.1 主要结论 | 第60-61页 |
| 5.2 展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 发表论文和参加科研情况 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
