| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-23页 |
| 1.1 DNA分子体外扩增技术研究进展 | 第9-11页 |
| 1.2 滚环扩增技术研究进展 | 第11-13页 |
| 1.3 Phi29DNA聚合酶研究进展 | 第13-15页 |
| 1.4 FLP和Cre位点特异性重组酶研究进展 | 第15-19页 |
| 1.5 本课题的研究内容与研究思路 | 第19-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-30页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 引物 | 第24-25页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第26-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-45页 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备及转化效率的计算 | 第30页 |
| 2.2.2 分子构建 | 第30-41页 |
| 2.2.3 蛋白的表达与纯化 | 第41-45页 |
| 第3章 酶的制备 | 第45-75页 |
| 3.1 相关重组蛋白表达系统的构建 | 第45-57页 |
| 3.1.1 T4连接酶及其变体 | 第45-47页 |
| 3.1.2 Phi29DNA聚合酶及其变体 | 第47-50页 |
| 3.1.3 Cre重组酶 | 第50-54页 |
| 3.1.4 FLP重组酶 | 第54-57页 |
| 3.2 蛋白的表达条件及纯化 | 第57-72页 |
| 3.2.1 Phi29DNA聚合酶及其变体的表达条件及纯化 | 第57-63页 |
| 3.2.2 Cre重组酶表达条件及纯化 | 第63-65页 |
| 3.2.3 I-HmuI的表达条件及纯化 | 第65-66页 |
| 3.2.4 RecJ和ExoIII的表达条件及纯化 | 第66-67页 |
| 3.2.5 T4连接酶及其变体的表达条件及纯化 | 第67-70页 |
| 3.2.6 PPiase的表达条件及纯化 | 第70-72页 |
| 3.2.7 FLP重组酶的表达条件及产物分析 | 第72页 |
| 3.3 本章小结 | 第72-75页 |
| 第4章 酶活分析 | 第75-81页 |
| 4.1 蛋白浓度测定和纯度分析 | 第75-76页 |
| 4.2 酶活性测定 | 第76-80页 |
| 4.2.1 I-HmuI活性的测定 | 第76-78页 |
| 4.2.2 Phi29DNApolymerase活性的测定 | 第78-79页 |
| 4.2.3 Crerecombinase活性的测定 | 第79-80页 |
| 4.3 本章小结 | 第80-81页 |
| 第5章 体外扩增实验 | 第81-85页 |
| 5.1 Phi29DNApolymerase、I-HmuI耦合的扩增反应 | 第81-82页 |
| 5.2 Phi29DNApolymerase、I-HmuI、Cre耦合的扩增反应 | 第82-84页 |
| 5.3 本章小结 | 第84-85页 |
| 第6章 结论与展望 | 第85-87页 |
| 6.1 结论 | 第85-86页 |
| 6.1.1 相关酶的制备 | 第85-86页 |
| 6.1.2 体外等温扩增实验 | 第86页 |
| 6.2 展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 论文和参加科研情况说明 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
