| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12页 |
| 1. 前言 | 第14-26页 |
| 1.1 铁蛋白概述 | 第14-21页 |
| 1.1.1 铁蛋白生理功能与结构 | 第14-19页 |
| 1.1.2 铁蛋白亚基分类和组织器官分布 | 第19页 |
| 1.1.3 铁蛋白表达、调控和与疾病的关联性 | 第19-21页 |
| 1.2 药物输送系统(DDS)的研究 | 第21-22页 |
| 1.2.1 药物输送系统概述 | 第21页 |
| 1.2.2 铁蛋白纳米包装的可行性与策略方法 | 第21-22页 |
| 1.3 顺铂抗癌机制及在肿瘤治疗中的应用 | 第22-24页 |
| 1.4 斑马鱼概述 | 第24-25页 |
| 1.5 本论文主要研究内容和意义 | 第25-26页 |
| 2. 材料和方法 | 第26-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.2 实验仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.3 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.4 重要试剂的配制 | 第28-33页 |
| 2.4.1 凝胶电泳相关试剂 | 第28-31页 |
| 2.4.2 三种凝胶染色液 | 第31页 |
| 2.4.4 蛋白鉴定相关试剂 | 第31-32页 |
| 2.4.5 细胞实验相关试剂 | 第32页 |
| 2.4.6 Real-time PCR实验相关试剂 | 第32-33页 |
| 2.5 实验方法 | 第33-45页 |
| 2.5.1 斑马鱼铁蛋白H和M亚基的重组表达 | 第33-38页 |
| 2.5.1.1 提取斑马鱼肝脏RNA及合成cDNA | 第33-34页 |
| 2.5.1.2 铁蛋白亚基的开放阅读框克隆及测序 | 第34-35页 |
| 2.5.1.3 构建原核表达铁蛋白亚基质粒 | 第35-36页 |
| 2.5.1.4 原核诱导铁蛋白亚基表达 | 第36-37页 |
| 2.5.1.5 亲和纯化带有组氨酸标签的重组铁蛋白亚基 | 第37页 |
| 2.5.1.6 铁蛋白柱层析纯化和电泳纯化 | 第37-38页 |
| 2.5.2 电泳分析斑马鱼铁蛋白H和M重组亚基 | 第38页 |
| 2.5.2.1 SDS-PAGE检验铁蛋白亚基纯度 | 第38页 |
| 2.5.2.2 Native-PAGE分析铁蛋白亚基自组装能力 | 第38页 |
| 2.5.3 MALDI-TOF MS/MS质谱技术鉴定铁蛋白H亚基 | 第38-39页 |
| 2.5.4 重组铁蛋白的基本理化特性 | 第39-40页 |
| 2.5.4.1 铁蛋白蛋白浓度测定 | 第39-40页 |
| 2.5.4.2 重组铁蛋白铁氧化中心活性测定及释放铁分析 | 第40页 |
| 2.5.5 荧光光谱检测斑马鱼重组铁蛋白荧光特性 | 第40-41页 |
| 2.5.5.1 重组铁蛋白碱性解离与重组的荧光光谱特性 | 第40页 |
| 2.5.5.2 重组铁蛋白蛋白壳外表面络合铂类抗癌药物特性 | 第40-41页 |
| 2.5.6 斑马鱼重组铁蛋白储存铁和纳米包装铂类抗癌药物能力 | 第41-42页 |
| 2.5.6.1 构建纳米顺铂核-铁蛋白 | 第41页 |
| 2.5.6.2 ICP-MS检测纳米顺铂核-铁蛋白包装顺铂与铁能力 | 第41-42页 |
| 2.5.7 rDRFerritin-CDDP诱导Hep G Ⅱ肝癌细胞凋亡研究 | 第42-43页 |
| 2.5.7.1 诱导Hep G Ⅱ肝癌细胞凋亡实验 | 第42页 |
| 2.5.7.2 流式细胞术检测Hep G Ⅱ肝癌细胞凋亡率 | 第42-43页 |
| 2.5.8 斑马鱼各器官中铁蛋白表达水平及受铁胁迫趋势 | 第43-45页 |
| 2.5.8.1 铁盐胁迫斑马鱼实验 | 第43页 |
| 2.5.8.2 六种组织器官RNA提取及cDNA合成 | 第43-44页 |
| 2.5.8.3 Real-time PCR分析斑马鱼铁蛋白亚基的表达量 | 第44-45页 |
| 3. 结果与讨论 | 第45-65页 |
| 3.1 斑马鱼铁蛋白的原核表达、纯化及理化特性 | 第45-53页 |
| 3.1.1 铁蛋白亚基克隆及序列分析 | 第45-46页 |
| 3.1.2 构建、表达和纯化重组铁蛋白亚基 | 第46-48页 |
| 3.1.3 鉴定重组铁蛋白H亚基 | 第48-50页 |
| 3.1.4 Native-PAGE检测铁蛋白亚基自组装能力和亚基比例 | 第50-52页 |
| 3.1.5 重组铁蛋白储存和释放铁分析 | 第52-53页 |
| 3.2 荧光光谱法检测斑马鱼重组铁蛋白的荧光特性 | 第53-56页 |
| 3.2.1 铁蛋白碱性解离与重组的荧光光谱特性 | 第53-54页 |
| 3.2.2 荧光光谱检测斑重组铁蛋白蛋白壳外表层络合铂类药物的能力 | 第54-56页 |
| 3.3 ICP-MS检测斑马鱼重组铁蛋白的铁量和包装铂类药物的能力 | 第56-57页 |
| 3.4 纳米顺铂核-斑马鱼铁蛋白诱导HEP G Ⅱ肝癌细胞凋亡 | 第57-58页 |
| 3.5 斑马鱼各器官中铁蛋白亚基的表达能力及受铁胁迫的趋势 | 第58-65页 |
| 3.5.1 各器官中铁蛋白亚基的正常生理表达 | 第58-59页 |
| 3.5.2 在铁盐胁迫下斑马鱼各器官中铁蛋白亚基的表达量变化趋势 | 第59-65页 |
| 4. 小结 | 第65-66页 |
| 缩略语表及中英文对照 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
