| 中文摘要 | 第12-15页 |
| Abstract | 第15-18页 |
| 符号说明 | 第19-22页 |
| 前言 | 第22-28页 |
| 1. 糖尿病心肌病的现状 | 第22-23页 |
| 2. 糖尿病心肌病与自噬和凋亡 | 第23-25页 |
| 2.1 自噬 | 第23页 |
| 2.2 糖尿病心肌病与自噬 | 第23-24页 |
| 2.3 糖尿病心肌病与凋亡 | 第24-25页 |
| 3. 糖尿病心肌病中氧化应激和自噬、凋亡 | 第25-26页 |
| 4. 蛋白磷酸酶2A (PP2A)简介 | 第26-27页 |
| 5. PP2A与糖尿病心肌病 | 第27-28页 |
| 实验部分 | 第28-59页 |
| 1. 实验材料 | 第28-30页 |
| 1.1 细胞株 | 第28页 |
| 1.2 腺病毒 | 第28页 |
| 1.3 试剂 | 第28-30页 |
| 1.4 仪器设备 | 第30页 |
| 1.5 实验动物 | 第30页 |
| 2. 实验方法 | 第30-39页 |
| 2.1 不同浓度葡萄糖对大鼠心肌H9c2细胞增殖的影响 | 第30页 |
| 2.2 高糖诱导实验性糖尿病心肌病 | 第30-31页 |
| 2.2.1 姬姆萨染色检测细胞面积 | 第31页 |
| 2.2.2 高糖对细胞内总蛋白浓度的影响 | 第31页 |
| 2.3 高糖对心肌细胞自噬的作用 | 第31-32页 |
| 2.3.1 AO染色检测自噬 | 第31页 |
| 2.3.2 溶酶体绿色荧光探针(LTG)试验 | 第31页 |
| 2.3.3 Western blotting检测自噬相关蛋白LC3B、P62的表达 | 第31-32页 |
| 2.4 高糖对心肌细胞的影响 | 第32-34页 |
| 2.4.1 高糖诱导心肌细胞氧化应激 | 第32-33页 |
| 2.4.1.1 ROS水平检测 | 第33页 |
| 2.4.1.2 Western blotting检测HIF-1 α、Nrf2蛋白的表达 | 第33页 |
| 2.4.2 ROS对高糖刺激的心肌细胞自噬的影响 | 第33-34页 |
| 2.4.2.1 AO染色检测自噬 | 第33页 |
| 2.4.2.2 溶酶体绿色荧光探针试验 | 第33-34页 |
| 2.4.2.3 Western blotting检测LC3B、P62蛋白的表达 | 第34页 |
| 2.4.3 Western blotting检测PI3K/Akt/mTOR和Erk蛋白的表达 | 第34页 |
| 2.5 PP2A抑制剂和激动剂最适浓度的选择 | 第34-35页 |
| 2.5.1 不同浓度PP2A抑制剂和激动剂对H9c2细胞活力的影响 | 第34页 |
| 2.5.2 Western blotting检测PP2A蛋白的表达 | 第34-35页 |
| 2.6 PP2A抑制剂和诱导剂对高糖诱导的心肌细胞Nrf2的影响 | 第35页 |
| 2.7 PP2A抑制剂和诱导剂对高糖诱导的心肌细胞自噬的影响 | 第35页 |
| 2.7.1 AO染色检测自噬 | 第35页 |
| 2.7.2 溶酶体绿色荧光探针试验 | 第35页 |
| 2.7.3 Western blotting检测LC3B、P62蛋白的表达 | 第35页 |
| 2.8 PP2A抑制剂和诱导剂对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响 | 第35-36页 |
| 2.8.1 Hoechst 33342染色检测凋亡 | 第35页 |
| 2.8.2 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第35-36页 |
| 2.8.3 Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、PARP、caspase-3的表达 | 第36页 |
| 2.9 PP2A高/低表达的腺病毒对高糖诱导的心肌细胞自噬的影响 | 第36-37页 |
| 2.9.1 LTG染色 | 第36-37页 |
| 2.9.2 Western blotting检测LC3B、P62蛋白的表达 | 第37页 |
| 2.10 PP2A高/低表达的腺病毒对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响 | 第37-38页 |
| 2.10.1 Hoechst 33342染色检测凋亡 | 第37页 |
| 2.10.2 Western blotting检测Bax、Bcl-2、PARP蛋白的表达 | 第37-38页 |
| 2.11 PP2A对糖尿病心肌病小鼠的影响 | 第38-39页 |
| 2.11.1 小鼠体重及血糖变化 | 第38页 |
| 2.11.2 小鼠血清中过氧化物酶的检测 | 第38页 |
| 2.11.3 小鼠心脏/体重比值 | 第38页 |
| 2.11.4 小鼠心肌组织中自噬及凋亡蛋白的表达 | 第38页 |
| 2.11.5 小鼠心肌组织HE染色 | 第38-39页 |
| 2.12 统计学分析 | 第39页 |
| 3. 实验结果 | 第39-59页 |
| 3.1 不同浓度葡萄糖对心肌H9c2细胞活力的影响 | 第39页 |
| 3.2 高糖诱导实验性糖尿病心肌病 | 第39-40页 |
| 3.2.1 高糖对心肌细胞表面积的影响 | 第40页 |
| 3.2.2 高糖对心肌细胞内总蛋白的影响 | 第40页 |
| 3.3 高糖对心肌细胞自噬的作用 | 第40-43页 |
| 3.3.1 AO染色观察自噬的变化 | 第41页 |
| 3.3.2 溶酶体绿色荧光探针染色观察自噬的变化 | 第41-42页 |
| 3.3.3 自噬相关蛋白的变化 | 第42-43页 |
| 3.4 ROS对高糖刺激的心肌细胞自噬的影响 | 第43-46页 |
| 3.4.1 高糖对心肌细胞氧化应激的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.2 ROS对高糖诱导的心肌细胞自噬的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.3 高糖对PI3K/Akt/mTOR和Erk表达的作用 | 第45-46页 |
| 3.5 PP2A抑制剂/诱导剂对高糖诱导的心肌细胞的影响 | 第46-47页 |
| 3.5.1 PP2A抑制剂和诱导剂最适浓度 | 第46-47页 |
| 3.5.2 不同浓度PP2A抑制剂/诱导剂对PP2A蛋白表达的影响 | 第47页 |
| 3.6 PP2A抑制剂/诱导剂对高糖诱导的心肌细胞Nrf2的影响 | 第47-48页 |
| 3.7 PP2A抑制剂/诱导剂对高糖诱导的心肌细胞自噬的影响 | 第48-50页 |
| 3.7.1 AO染色观察自噬的变化 | 第48-49页 |
| 3.7.2 溶酶体绿色荧光探针染色观察自噬的变化 | 第49-50页 |
| 3.7.3 自噬相关蛋白的变化 | 第50页 |
| 3.8 PP2A抑制剂/诱导剂对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响 | 第50-53页 |
| 3.8.1 Hoechst 33342染色检测凋亡 | 第50-51页 |
| 3.8.2 流式细胞术检测各组细胞凋亡率 | 第51-52页 |
| 3.8.3 Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、PARP、caspase-3的表达 | 第52-53页 |
| 3.9 PP2A高/低表达腺病毒对高糖诱导的心肌细胞自噬的影响 | 第53-54页 |
| 3.9.1 LTG染色 | 第53页 |
| 3.9.2 自噬相关蛋白的表达 | 第53-54页 |
| 3.10 PP2A高/低表达腺病毒对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响 | 第54-55页 |
| 3.10.1 Hoechst 33342染色检测细胞凋亡 | 第54-55页 |
| 3.10.2 Western blotting检测Bcl-2、Bax、PARP蛋白的表达 | 第55页 |
| 3.11 动物实验结果 | 第55-59页 |
| 3.11.1 小鼠体重及血糖变化 | 第55-56页 |
| 3.11.2 小鼠血清中过氧化物酶的检测 | 第56页 |
| 3.11.3 小鼠心脏/体重比值 | 第56-57页 |
| 3.11.4 小鼠心肌组织中Nrf2、自噬及凋亡蛋白的表达检测 | 第57-58页 |
| 3.11.5 心肌组织HE染色观察 | 第58-59页 |
| 讨论 | 第59-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第72-73页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第73页 |
