| 缩略语表 | 第7-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 文献回顾 | 第17-31页 |
| 心脏成纤维细胞 | 第17-24页 |
| 1.心脏成纤维细胞的起源 | 第17-19页 |
| 2.心脏成纤维细胞的生理功能 | 第19-24页 |
| 心脏纤维化的分子机制 | 第24-27页 |
| 1.心脏纤维化发生的一般过程 | 第24页 |
| 2.心脏成纤维细胞对刺激的响应 | 第24-27页 |
| RNA 结合蛋白 HuR | 第27-31页 |
| 1.AMPK 信号通路 | 第28-29页 |
| 2.p38-MAPK 信号通路 | 第29页 |
| 3.蛋白激酶-C（Protein kinase C，PKC) | 第29-31页 |
| 第一部分 心脏成纤维细胞的培养及外源 TGF-β1 对细胞内 TGF-β1 的影响 | 第31-39页 |
| 引言 | 第31页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第31-33页 |
| 1.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 1.3 主要仪器 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-36页 |
| 2.1 心脏成纤维细胞的培养 | 第33页 |
| 2.2 外源性 TGF-β1 对心肌成纤维细胞的处理 | 第33页 |
| 2.3 RNA 的提取和反转录 | 第33-34页 |
| 2.3.1 RNA 提取 | 第33-34页 |
| 2.3.2 RNA 浓度测定 | 第34页 |
| 2.3.3 反转录为 cDNA | 第34页 |
| 2.4 荧光实时定量 PCR（real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR） | 第34-35页 |
| 2.4.1 qRT-PCR 引物 | 第34页 |
| 2.4.2 反应体系 | 第34-35页 |
| 2.4.3 qRT-PCR 反应 | 第35页 |
| 2.5 TGF-β1mRNA 半衰期检测 | 第35页 |
| 2.6 TGF-β1 启动子活性检测 | 第35-36页 |
| 2.6.1 TGF-β1 启动子报告基因质粒构建 | 第35页 |
| 2.6.2 报告基因质粒的转染 | 第35-36页 |
| 2.6.3 荧光素酶活性检测 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-38页 |
| 3.1 外源性 TGF-β1 能促进内源性 TGF-β1 的表达 | 第36-37页 |
| 3.2 外源性 TGF-β1 增加了内源性 TGF-β1mRNA 的稳定性 | 第37页 |
| 3.3 外源性 TGF-β1 对细胞内 TGF-β1 启动子活性的影响 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-39页 |
| 第二部分 外源 TGF-β1 对 HuR 的影响 | 第39-46页 |
| 引言 | 第39页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第39-40页 |
| 1.1 实验材料 | 第39页 |
| 1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 1.3 主要仪器 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-42页 |
| 2.1 胞浆/胞核蛋白分离提取 | 第40页 |
| 2.2 免疫印迹法（western-blotting） | 第40-41页 |
| 2.2.1 细胞总蛋白的获取 | 第40-41页 |
| 2.2.2 SDS-PAGE 电泳和转移 | 第41页 |
| 2.2.3 western-blotting | 第41页 |
| 2.3 P38-MAPK 活性检测 | 第41页 |
| 2.4 间接免疫荧光 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-45页 |
| 3.1 外源 TGF-β1 刺激下，HuR 从胞核易位到胞浆 | 第42页 |
| 3.2 TGF-β1 刺激对 P38-MAPK 的影响 | 第42-43页 |
| 3.3 P38-MAPK 的活化介导了 HuR 的胞浆/胞核易位 | 第43-44页 |
| 3.4 间接免疫荧光验证 TGF-β1 刺激下，HuR 的亚细胞定位情况 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 第三部分 HuR 的活化对内源 TGF-β1 的影响 | 第46-53页 |
| 引言 | 第46页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第46-47页 |
| 1.1 实验材料 | 第46页 |
| 1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 1.3 主要仪器 | 第46-47页 |
| 2 方法 | 第47-49页 |
| 2.1 HuR 的体外干涉实验 | 第47页 |
| 2.1.1 干涉策略 | 第47页 |
| 2.1.2 细胞转染 | 第47页 |
| 2.1.3 预先干涉 HuR 后，外源 TGF-β1 刺激对内源 TGF-β1 的影响 | 第47页 |
| 2.2 TGF-β1mRNA3’UTR 报告基因实验 | 第47-48页 |
| 2.2.1 TGF-β1mRNA3’UTR 序列分析 | 第47-48页 |
| 2.2.2 TGF-β1mRNA3’UTR 报告基因质粒及 ARE 突变质粒的构建 | 第48页 |
| 2.2.3 报告基因质粒转染和荧光素酶活性检测 | 第48页 |
| 2.3 RNA-IP 实验 | 第48-49页 |
| 3 结果 | 第49-52页 |
| 3.1 干涉 HuR 明显降低了外源 TGF-β1 所致的内源 TGF-β1 的表达 | 第49-50页 |
| 3.2 干涉 HuR 降低了 TGF-β1 的 mRNA 稳定性 | 第50-51页 |
| 3.3 HuR 对 TGF-β1mRNA3’UTR 报告基因的影响 | 第51页 |
| 3.4 RNA-IP 验证 HuR 与 TGF-β1mRNA 的直接作用 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 第四部分 HuR 对心脏成纤维细胞纤维化反应的影响 | 第53-56页 |
| 引言 | 第53页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-54页 |
| 2.1 细胞处理 | 第53页 |
| 2.2 TGF-β1 下游纤维化相关分子的 qRT-PCR 检测 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-74页 |
| 个人简历和研究成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
