| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第1章 引言 | 第7-10页 |
| 第2章 材料 | 第10-14页 |
| 2.1 细胞株 | 第10页 |
| 2.2 主要试剂 | 第10页 |
| 2.3 自配试剂 | 第10-13页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第13-14页 |
| 第3章 方法 | 第14-25页 |
| 3.1 细胞培养 | 第14-15页 |
| 3.1.1 细胞传代 | 第14页 |
| 3.1.2 细胞换液 | 第14页 |
| 3.1.3 细胞冻存 | 第14-15页 |
| 3.1.4 细胞复苏 | 第15页 |
| 3.2 pEGFP-N2-PTEN 重组质粒的构建 | 第15-20页 |
| 3.2.1 PTEN 引物的设计 | 第15页 |
| 3.2.2 pMD18-T-PTEN 重组质粒的构建 | 第15-20页 |
| 3.2.2.1 RNA 提取 | 第15-16页 |
| 3.2.2.2 RNA 逆转录成 cDNA | 第16页 |
| 3.2.2.3 PCR 扩增 | 第16-17页 |
| 3.2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第17页 |
| 3.2.2.5 琼脂糖凝胶回收 | 第17-18页 |
| 3.2.2.6 构建 pMD18-T-PTEN 质粒 | 第18-19页 |
| 3.2.2.7 pMD18-T-PTEN 质粒的验证 | 第19-20页 |
| 3.2.2.8 pEGFP-N2-PTEN 质粒构建及验证 | 第20页 |
| 3.3 pEGFP-N2-PTEN 瞬时转染 HEC-1B 细胞 | 第20-21页 |
| 3.3.1 细胞分组 | 第20页 |
| 3.2.2 细胞转染 | 第20-21页 |
| 3.4 Western blot 鉴定 PTEN 基因在 HEC-1B 细胞中的表达 | 第21-24页 |
| 3.4.1 蛋白提取 | 第21页 |
| 3.4.2 蛋白浓度测定 | 第21-22页 |
| 3.4.3 SDS－PAGE 电泳 | 第22页 |
| 3.4.4 转膜 | 第22-23页 |
| 3.4.5 免疫反应 | 第23页 |
| 3.4.6 化学发光，显影，定影 | 第23页 |
| 3.4.7 凝胶图象分析 | 第23-24页 |
| 3.5 MTT 法检测各组 HEC-1B 细胞的增殖抑制情况 | 第24页 |
| 3.6 统计学分析 | 第24-25页 |
| 第4章 结果 | 第25-30页 |
| 4.1 PCR 产物 PTEN 的扩增 | 第25页 |
| 4.2 pMD18-T-PTEN 及 pEGFP-N2-PTEN 重组质粒的鉴定 | 第25-27页 |
| 4.2.1 pMD18-T-PTEN 重组质粒的酶切鉴定 | 第25-26页 |
| 4.2.2 目的基因 PTEN 的序列鉴定 | 第26页 |
| 4.2.3 重组表达载体 pEGFP-N2-PTEN 的酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 4.3 荧光显微镜下 pEGFP-N2-PTEN 重组质粒的表达 | 第27-28页 |
| 4.4 HEC-1B 细胞中目的基因 PTEN 的蛋白表达 | 第28页 |
| 4.5 过表达野生型 PTEN 对 HEC-1B 细胞增殖影响 | 第28-30页 |
| 第5章 讨论 | 第30-33页 |
| 第6章 结论 | 第33-34页 |
| 致谢 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-37页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第37-38页 |
| 综述 | 第38-44页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
