| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表(ABBREVIATION) | 第11-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 猪细小病毒的概述 | 第12-17页 |
| 1.1.1 猪细小病毒病的研究进展 | 第12页 |
| 1.1.2 PPV基因组结构及主要编码蛋白 | 第12-15页 |
| 1.1.3 PPV的生物学性质 | 第15-16页 |
| 1.1.4 PPV疫苗的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 猪博卡病毒的概述 | 第17-21页 |
| 1.2.1 猪博卡病毒的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.2 猪博卡病毒基因组结构及主要编码蛋白 | 第19-21页 |
| 1.2.3 猪博卡病毒的诊断与预防 | 第21页 |
| 1.3 猪伪狂犬病毒的概述 | 第21-24页 |
| 1.3.1 猪伪狂犬病的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3.2 伪狂犬病毒基因组结构及主要编码蛋白功能研究 | 第22页 |
| 1.3.3 伪狂犬病毒基因缺失疫苗的研究 | 第22-24页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 第3章 材料与方法 | 第25-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-30页 |
| 3.1.1 细菌、病毒和细胞 | 第25页 |
| 3.1.2 载体 | 第25-27页 |
| 3.1.3 工具酶及主要试剂 | 第27-28页 |
| 3.1.4 主要缓冲液与相关试剂的配制 | 第28-30页 |
| 3.1.4.1 细菌与细胞培养基相关试剂 | 第28页 |
| 3.1.4.2 ELISA实验相关试剂 | 第28页 |
| 3.1.4.3 SDS-PAGE和Western-blot实验相关试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.4.4 原核表达蛋白纯化相关试剂 | 第29页 |
| 3.1.4.5 空斑实验相关试剂 | 第29-30页 |
| 3.1.5 实验动物 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-42页 |
| 3.2.1 实验引物 | 第30-31页 |
| 3.2.2 目的片段的扩增 | 第31页 |
| 3.2.3 目的片段及载体的酶切及连接反应 | 第31-32页 |
| 3.2.4 连接产物和质粒的转化 | 第32-33页 |
| 3.2.5 质粒的制备与酶切鉴定 | 第33页 |
| 3.2.6 原核蛋白的表达 | 第33页 |
| 3.2.7 目的蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| 3.2.8 细胞转染 | 第34-35页 |
| 3.2.9 单克隆抗体制备过程中动物免疫程序 | 第35页 |
| 3.2.10 细胞融合 | 第35-36页 |
| 3.2.11 方阵滴定法确定最佳包被浓度 | 第36页 |
| 3.2.12 间接酶联免疫吸附试验 | 第36-37页 |
| 3.2.13 杂交瘤细胞的克隆及抗体的制备 | 第37页 |
| 3.2.14 SDS-PAGE电泳实验 | 第37-38页 |
| 3.2.15 Western-blot分析 | 第38页 |
| 3.2.16 病毒基因组的大量提取 | 第38-39页 |
| 3.2.17 空斑实验 | 第39页 |
| 3.2.18 制备检测重组病毒的PCR模板 | 第39页 |
| 3.2.19 重组病毒的纯度检测 | 第39-40页 |
| 3.2.20 病毒生长曲线的测定 | 第40页 |
| 3.2.21 病毒TCID_(50)的测定 | 第40页 |
| 3.2.22 重组病毒小鼠免疫 | 第40-41页 |
| 3.2.23 ELISA抗体水平检测 | 第41页 |
| 3.2.24 中和抗体水平检测 | 第41-42页 |
| 第4章 结果与分析 | 第42-54页 |
| 4.1 单克隆抗体的制备 | 第42-46页 |
| 4.1.1 PBoV-VP2原核及真核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 4.1.2 PBoV-VP2原核表达和纯化 | 第43页 |
| 4.1.3 蛋白最佳包被浓度的确定 | 第43-44页 |
| 4.1.4 免疫小鼠效价的确定 | 第44-45页 |
| 4.1.5 单克隆抗体的Western-blot验证 | 第45-46页 |
| 4.2 重组病毒的制备实验 | 第46-54页 |
| 4.2.1 中间转移载体的构建 | 第46-47页 |
| 4.2.2 重组病毒的筛选与纯化 | 第47-48页 |
| 4.2.3 重组病毒LacZ基因的检测 | 第48-49页 |
| 4.2.4 重组病毒中蛋白表达的鉴定 | 第49-50页 |
| 4.2.5 重组病毒的增殖曲线 | 第50页 |
| 4.2.6 重组病毒在不同细胞上的增殖滴度 | 第50-51页 |
| 4.2.7 重组病毒的遗传稳定性研究 | 第51页 |
| 4.2.8 病毒免疫小鼠的ELISA抗体水平检测 | 第51-53页 |
| 4.2.9 病毒诱导产生的中和抗体水平检测 | 第53-54页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第54-57页 |
| 5.1 讨论 | 第54-56页 |
| 5.1.1 单克隆抗体制备过程中免疫原的制备 | 第54页 |
| 5.1.2 单克隆抗体的验证 | 第54-55页 |
| 5.1.3 亲本毒株的选择 | 第55页 |
| 5.1.4 转移载体与亲本株病毒基因组 | 第55页 |
| 5.1.5 重组病毒的生物学特性研究 | 第55-56页 |
| 5.1.6 重组病毒诱导动物的免疫反应 | 第56页 |
| 5.2 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
