| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 银耳的介绍 | 第11-13页 |
| 1.1.1 银耳的形态特征和生长环境 | 第12页 |
| 1.1.2 银耳的生活史 | 第12-13页 |
| 1.1.3 银耳的食药用价值 | 第13页 |
| 1.1.4 银耳的生物反应器研究进展 | 第13页 |
| 1.2 胰岛素的介绍 | 第13-15页 |
| 1.2.1 胰岛素的开发史 | 第14-15页 |
| 1.2.2 胰岛素的分子结构 | 第15页 |
| 1.2.3 胰岛素的基因工程研究进展 | 第15页 |
| 1.3 密码子偏好性分析及其应用 | 第15-20页 |
| 1.3.1 密码子偏好性概述 | 第15-16页 |
| 1.3.2 常用于密码子偏好性分析方法 | 第16-19页 |
| 1.3.3 密码子偏好性分析的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 食用菌启动子概述 | 第20-21页 |
| 1.4.1 真核生物启动子的分类与组成 | 第20-21页 |
| 1.4.2 应用于食用菌表达外源基因的启动子 | 第21页 |
| 1.5 本研究的内容和目的 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-41页 |
| 2.1 材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要药品与试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-41页 |
| 2.2.1 基因的优化设计与人工合成 | 第26页 |
| 2.2.2 中间载体pUC-BCA1(1)的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.3 中间载体pUC-BCA1(2)的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.4 中间载体pBHg-BCA1(2)的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.5 目的载体pBHg-BCA1-G06的构建 | 第30-32页 |
| 2.2.6 目的载体pBHg-BCA-G06的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.7 目的载体pBHg-BCA1-gpd的构建 | 第33页 |
| 2.2.8 银耳转化子Tr 26和Tr 65对潮霉素的抗性梯度实验 | 第33页 |
| 2.2.9 转化目的载体至根癌农杆菌EHA105 | 第33-35页 |
| 2.2.10 农杆菌介导质粒转化银耳孢子 | 第35页 |
| 2.2.11 银耳孢子基因组DNA提取及PCR分析 | 第35-37页 |
| 2.2.12 银耳孢子总RNA提取及RT-PCR分析 | 第37-39页 |
| 2.2.13 银耳孢子中人胰岛素基因表达产物的粗提取和ELISA分析 | 第39-41页 |
| 2.2.14 qRT-PCR相对定量法检测转基因银耳中BCA或BCAI基因拷贝数 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-66页 |
| 3.1 DNA片段MCS1-BCA1-MCS2的序列设计 | 第41-42页 |
| 3.2 中间载体pUC-BCA1(1)的构建 | 第42页 |
| 3.3 中间载体pUC-BCA1(2)的构建 | 第42-43页 |
| 3.4 中间载体pBHg-BCA1(2)的构建 | 第43-44页 |
| 3.5 目的载体pBHg-BCA1-G06的构建 | 第44-46页 |
| 3.6 目的载体pBHg-BCA-G06的构建 | 第46-48页 |
| 3.7 目的载体pBHg-BCA1-gpd的构建 | 第48-49页 |
| 3.8 银耳转化子Tr 26和Tr 65对潮霉素的抗性梯度实验 | 第49-52页 |
| 3.9 转化目的载体至根癌农杆菌EHA105 | 第52页 |
| 3.10 农杆菌介导质粒转化银耳孢子 | 第52-54页 |
| 3.11 PCR检测银耳孢子基因组DNA | 第54-56页 |
| 3.12 RT-PCR检测银耳孢子总RNA | 第56-58页 |
| 3.13 ELISA检测银耳孢子中人胰岛素基因表达产物 | 第58-62页 |
| 3.14 实时荧光定量PCR法检测BCA或BCA1基因的相对含量 | 第62-66页 |
| 4. 讨论 | 第66-68页 |
| 5 总结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录1 DNA序列 | 第75-81页 |
| 附录2 引物序列 | 第81-82页 |
| 附录3 构建各载体的技术路线 | 第82-86页 |
| 附录4 实时荧光定量PCR相关图谱 | 第86-90页 |
| 附录5 缩略词 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
