| 缩略语表 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-14页 |
| 英文摘要 | 第14-20页 |
| 前言 | 第21-23页 |
| 文献回顾 | 第23-39页 |
| 第一部分 CDX1 在胃癌组织的的表达和功能 | 第39-50页 |
| 1 材料和仪器 | 第40-41页 |
| 1.1 细胞株 | 第40页 |
| 1.2 质粒和慢病毒 | 第40页 |
| 1.3 主要试剂和材料 | 第40-41页 |
| 1.4 主要仪器 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-45页 |
| 2.1 免疫组织化学 | 第41-42页 |
| 2.2 慢病毒载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.3 细胞的慢病毒感染 | 第43页 |
| 2.4 Western Blot | 第43-44页 |
| 2.5 XTT 细胞增殖检测 | 第44页 |
| 2.6 流式细胞周期检测 | 第44-45页 |
| 2.7 流式细胞凋亡检测 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-48页 |
| 3.1 CDX1 在胃癌组织中表达降低 | 第45-46页 |
| 3.2 CDX1 体外抑制胃癌细胞增殖 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第二部分 miR-296-5p 同 CDX1 在胃癌细胞和组织中表达负相关 | 第50-62页 |
| 1 材料和仪器 | 第50-51页 |
| 1.1 细胞株 | 第50页 |
| 1.2 组织标本 | 第50-51页 |
| 1.3 主要试剂 | 第51页 |
| 1.4 主要仪器 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-54页 |
| 2.1 细胞培养 | 第51-52页 |
| 2.2 细胞总 RNA 提取及定量 | 第52页 |
| 2.3 细胞总蛋白提取及定量 | 第52页 |
| 2.4 组织总 RNA 提取及定量 | 第52-53页 |
| 2.5 组织总蛋白提取及定量 | 第53页 |
| 2.6 荧光实时定量 PCR | 第53页 |
| 2.7 Western Blot | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-59页 |
| 3.1 生物信息学分析可能调控 CDX1 的 microRNA | 第54页 |
| 3.2 microRNA-296-5p 胃癌细胞中的表达 | 第54-55页 |
| 3.3 胃癌细胞中 miR-296-5p 和 CDX1 表达负相关 | 第55-56页 |
| 3.4 胃癌和癌旁组织中 miR-296-5p 和 CDX1 表达负相关 | 第56-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 第三部分 miR-296-5p 在转录后水平调控 CDX1 表达 | 第62-68页 |
| 1 材料和仪器 | 第62-64页 |
| 1.1 细胞株 | 第62页 |
| 1.2 质粒 | 第62-63页 |
| 1.3 主要试剂和材料 | 第63页 |
| 1.4 主要仪器 | 第63-64页 |
| 2 方法 | 第64-65页 |
| 2.1 细胞培养 | 第64页 |
| 2.2 报告基因载体的构建 | 第64页 |
| 2.3 细胞转染及 Luciferase 检测 | 第64-65页 |
| 2.4 细胞转染、总 RNA 和总蛋白提取 | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-67页 |
| 3.1 miR-296-5p 可直接结合 CDX13’-UTR | 第65-66页 |
| 3.2 miR-296-5p 在转录后水平调控 CDX1 表达 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-68页 |
| 第四部分 miR-296-5p 通过抑制 CDX1 表达促进胃癌增殖 | 第68-77页 |
| 1 材料和仪器 | 第68-69页 |
| 1.1 CDX1 病毒载体 | 第68页 |
| 1.2 CDX1+3’-UTR 载体：同上 | 第68页 |
| 1.3 CDX1 siRNA 载体 | 第68-69页 |
| 1.4 其余试剂同前 | 第69页 |
| 2 方法 | 第69-70页 |
| 2.1 脂质体细胞转染 | 第69-70页 |
| 2.2 转染效率 PCR 检测 | 第70页 |
| 2.3 XTT 细胞增殖检测 | 第70页 |
| 2.4 流式细胞周期和凋亡检测 | 第70页 |
| 2.5 慢病毒载体构建及转染 | 第70页 |
| 3 结果 | 第70-75页 |
| 3.1 miR-296-5p 体内外促进胃癌增殖 | 第70-71页 |
| 3.2 miR-296-5p 影响细胞周期和凋亡率 | 第71-72页 |
| 3.3 miR-296-5p 对 CDX1 调控依赖 UTR | 第72-74页 |
| 3.4 CDX1 介导 miR-296-5p 对胃癌增殖促进作用 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-77页 |
| 第五部分 miR-296-5p-CDX1 轴通过活化 ERK1/2 促进胃癌增殖 | 第77-85页 |
| 1 材料和仪器 | 第77-78页 |
| 2 方法 | 第78-79页 |
| 2.1 脂质体转染 | 第78页 |
| 2.2 细胞总蛋白提取 | 第78页 |
| 2.3 细胞共转染 | 第78页 |
| 2.4 MEK1 抑制剂共孵育 | 第78页 |
| 2.5 Western Blot | 第78页 |
| 2.6 流式细胞周期和凋亡测定 | 第78-79页 |
| 3 结果 | 第79-83页 |
| 3.1 miR-296-5p 和 CDX1 对 ERK1/2 磷酸化调控作用相反 | 第79-80页 |
| 3.2 miR-296-5p-CDX1 轴调控 ERK1/2 磷酸化并影响细胞周期和凋亡相关蛋白 | 第80-81页 |
| 3.3 PD98059 抑制 miR-296-5p-CDX1 调控的 ERK 活化 | 第81页 |
| 3.4 抑制 ERK1/2 活化逆转 miR-296-5p-CDX1 对细胞周期和凋亡的影响 | 第81-83页 |
| 4 讨论 | 第83-85页 |
| 小结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 个人简历和研究成果 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
