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红树林来源Streptomyces sp.OUC6819中多烯大环内酯类抗生素的生物合成研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
1 前言第12-22页
    1.1 研究背景第12-13页
    1.2 海洋放线菌研究的历史第13-14页
    1.3 海洋放线菌的分布和分类第14-15页
    1.4 海洋放线菌来源的次级代谢产物第15页
    1.5 多烯大环内酯类化合物第15-20页
        1.5.1 多烯大环内酯类化合物的生物活性与研究进展第15-16页
        1.5.2 多烯大环内酯类化合物的生物合成第16-20页
        1.5.3 多烯大环内酯类化合物的组合生物合成第20页
    1.6 本研究的目的和意义第20-22页
2 Streptomyces sp.OUC6819最适生长条件的摸索第22-29页
    2.1 引言第22页
    2.2 实验材料第22-25页
        2.2.1 菌株第22页
        2.2.2 实验仪器第22-23页
        2.2.3 培养基第23-25页
        2.2.4 抗生素及其使用浓度第25页
    2.3 实验方法第25-26页
        2.3.1 Streptomyces sp.OUC6819最适培养条件的摸索第25页
        2.3.2 抗生素敏感实验第25-26页
        2.3.3 Streptomyces sp.OUC6819的菌种保藏第26页
    2.4 实验结果与分析第26-28页
        2.4.1 Streptomyces sp.OUC6819最适培养条件的摸索第26-28页
        2.4.2 抗生素敏感实验第28页
    2.5 小结第28-29页
3 Streptomyces sp.OUC6819基因组文库的构建第29-40页
    3.1 引言第29页
    3.2 实验材料第29-31页
        3.2.1 菌株与质粒第29-30页
        3.2.2 实验试剂第30页
        3.2.3 实验仪器第30页
        3.2.4 生化试剂第30-31页
    3.3 实验方法第31-36页
        3.3.1 Streptomyces sp.OUC6819基因组DNA的提取及纯化第31-32页
        3.3.2 基因组DNA的部分酶切第32-33页
        3.3.3 低熔点琼脂糖凝胶筛选目的片段DNA及目的片段的去磷酸化第33-34页
        3.3.4 载体SuperCos1的处理第34页
        3.3.5 载体和目的片段的连接反应第34-35页
        3.3.6 体外包装第35页
        3.3.7 侵染适宜的宿主菌第35-36页
        3.3.8 文库质量的检测第36页
        3.3.9 基因文库的保存第36页
    3.4 实验结果与分析第36-39页
        3.4.1 基因组DNA的提取第36-37页
        3.4.2 基因组片段的部分酶切第37页
        3.4.3 载体的处理及与目的片段的连接第37-38页
        3.4.4 文库效价的检测第38-39页
        3.4.5 文库质量的检测第39页
    3.5 小结第39-40页
4 多烯大环内酯类生物合成基因簇的克隆与鉴定第40-60页
    4.1 引言第40-41页
    4.2 实验材料第41-44页
        4.2.1 菌株和质粒第41-43页
        4.2.2 本章节所用的引物第43页
        4.2.3 培养基和抗生素使用浓度第43页
        4.2.4 生化试剂第43-44页
        A b st r ac t第44页
    4.3 实验方法第44-51页
        4.3.1 Streptomyces sp.OUC6819基因组文库的筛选第44页
        4.3.2 含有gap的DNA片段的亚克隆第44页
        4.3.3 PCR及相关技术第44-45页
        4.3.4 DNA的纯化(试剂盒法)第45-46页
        4.3.5 琼脂糖凝胶电泳中DNA片段的胶回收第46页
        4.3.6 大肠杆菌的感受态细胞制备(CaCl2法)及转化第46-47页
        4.3.7 DNA连接反应第47页
        4.3.8 大肠杆菌中质粒的快速检测第47-48页
        4.3.9 大肠杆菌质粒的小量提取第48-49页
        4.3.10 Streptomyces sp.OUC6819胞内R-M反应液的制备第49页
        4.3.11 大肠杆菌—链霉菌间接合转移第49-50页
        4.3.12 HPLC及ESI-MS分析第50-51页
        4.3.13 序列分析网站第51页
        4.3.14 其他第51页
    4.4 实验结果与分析第51-58页
        4.4.1 Streptomyces sp.OUC6819基因组文库的筛选第51-52页
        4.4.2 Streptomyces sp.OUC6819基因簇的生物信息学分析第52-55页
        4.4.3 Streptomyces sp.OUC6819限制修饰系统(restriction-modification system,R-M系统)的研究第55-56页
        4.4.4 调控基因opeA、opeC、opeF阻断质粒的构建第56页
        4.4.5 Streptomyces sp.OUC6819中opeF基因双交换同源重组第56-57页
        4.4.6 opeF基因阻断突变株多烯大环内酯类化合物产生情况的检测第57-58页
    4.5 小结第58-60页
5 opeF基因调控机制的研究第60-67页
    5.1 引言第60页
    5.2 实验材料第60-61页
        5.2.1 菌株和质粒第60页
        5.2.2 培养基第60页
        5.2.3 生化试剂第60-61页
        5.2.4 本章节用到的引物第61页
        5.2.5 实验仪器第61页
    5.3 实验方法第61-64页
        5.3.1 RNA的提取第61-62页
        5.3.2 DNaseI处理RNA样品第62页
        5.3.3 RNA浓度和纯度的检测第62-63页
        5.3.4 cDNA的合成第63页
        5.3.5 RT-PCR第63-64页
    5.4 实验结果与分析第64-66页
        5.4.1 RNA提取的质量检测第64-65页
        5.4.2 RT-PCR测定opeF基因的表达第65-66页
    5.5 小结第66-67页
6 结语与创新点第67-69页
    6.1 结语第67-68页
    6.2 创新点第68页
    6.3 未来工作展望第68-69页
参考文献第69-76页
致谢第76-77页
个人简历及在校期间发表的论文第77-78页

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