| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 研究背景 | 第12-13页 |
| 1.2 海洋放线菌研究的历史 | 第13-14页 |
| 1.3 海洋放线菌的分布和分类 | 第14-15页 |
| 1.4 海洋放线菌来源的次级代谢产物 | 第15页 |
| 1.5 多烯大环内酯类化合物 | 第15-20页 |
| 1.5.1 多烯大环内酯类化合物的生物活性与研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5.2 多烯大环内酯类化合物的生物合成 | 第16-20页 |
| 1.5.3 多烯大环内酯类化合物的组合生物合成 | 第20页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 2 Streptomyces sp.OUC6819最适生长条件的摸索 | 第22-29页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.2.1 菌株 | 第22页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.3 培养基 | 第23-25页 |
| 2.2.4 抗生素及其使用浓度 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-26页 |
| 2.3.1 Streptomyces sp.OUC6819最适培养条件的摸索 | 第25页 |
| 2.3.2 抗生素敏感实验 | 第25-26页 |
| 2.3.3 Streptomyces sp.OUC6819的菌种保藏 | 第26页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第26-28页 |
| 2.4.1 Streptomyces sp.OUC6819最适培养条件的摸索 | 第26-28页 |
| 2.4.2 抗生素敏感实验 | 第28页 |
| 2.5 小结 | 第28-29页 |
| 3 Streptomyces sp.OUC6819基因组文库的构建 | 第29-40页 |
| 3.1 引言 | 第29页 |
| 3.2 实验材料 | 第29-31页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第29-30页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第30页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第30页 |
| 3.2.4 生化试剂 | 第30-31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-36页 |
| 3.3.1 Streptomyces sp.OUC6819基因组DNA的提取及纯化 | 第31-32页 |
| 3.3.2 基因组DNA的部分酶切 | 第32-33页 |
| 3.3.3 低熔点琼脂糖凝胶筛选目的片段DNA及目的片段的去磷酸化 | 第33-34页 |
| 3.3.4 载体SuperCos1的处理 | 第34页 |
| 3.3.5 载体和目的片段的连接反应 | 第34-35页 |
| 3.3.6 体外包装 | 第35页 |
| 3.3.7 侵染适宜的宿主菌 | 第35-36页 |
| 3.3.8 文库质量的检测 | 第36页 |
| 3.3.9 基因文库的保存 | 第36页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.4.1 基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.4.2 基因组片段的部分酶切 | 第37页 |
| 3.4.3 载体的处理及与目的片段的连接 | 第37-38页 |
| 3.4.4 文库效价的检测 | 第38-39页 |
| 3.4.5 文库质量的检测 | 第39页 |
| 3.5 小结 | 第39-40页 |
| 4 多烯大环内酯类生物合成基因簇的克隆与鉴定 | 第40-60页 |
| 4.1 引言 | 第40-41页 |
| 4.2 实验材料 | 第41-44页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第41-43页 |
| 4.2.2 本章节所用的引物 | 第43页 |
| 4.2.3 培养基和抗生素使用浓度 | 第43页 |
| 4.2.4 生化试剂 | 第43-44页 |
| A b st r ac t | 第44页 |
| 4.3 实验方法 | 第44-51页 |
| 4.3.1 Streptomyces sp.OUC6819基因组文库的筛选 | 第44页 |
| 4.3.2 含有gap的DNA片段的亚克隆 | 第44页 |
| 4.3.3 PCR及相关技术 | 第44-45页 |
| 4.3.4 DNA的纯化(试剂盒法) | 第45-46页 |
| 4.3.5 琼脂糖凝胶电泳中DNA片段的胶回收 | 第46页 |
| 4.3.6 大肠杆菌的感受态细胞制备(CaCl2法)及转化 | 第46-47页 |
| 4.3.7 DNA连接反应 | 第47页 |
| 4.3.8 大肠杆菌中质粒的快速检测 | 第47-48页 |
| 4.3.9 大肠杆菌质粒的小量提取 | 第48-49页 |
| 4.3.10 Streptomyces sp.OUC6819胞内R-M反应液的制备 | 第49页 |
| 4.3.11 大肠杆菌—链霉菌间接合转移 | 第49-50页 |
| 4.3.12 HPLC及ESI-MS分析 | 第50-51页 |
| 4.3.13 序列分析网站 | 第51页 |
| 4.3.14 其他 | 第51页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第51-58页 |
| 4.4.1 Streptomyces sp.OUC6819基因组文库的筛选 | 第51-52页 |
| 4.4.2 Streptomyces sp.OUC6819基因簇的生物信息学分析 | 第52-55页 |
| 4.4.3 Streptomyces sp.OUC6819限制修饰系统(restriction-modification system，R-M系统)的研究 | 第55-56页 |
| 4.4.4 调控基因opeA、opeC、opeF阻断质粒的构建 | 第56页 |
| 4.4.5 Streptomyces sp.OUC6819中opeF基因双交换同源重组 | 第56-57页 |
| 4.4.6 opeF基因阻断突变株多烯大环内酯类化合物产生情况的检测 | 第57-58页 |
| 4.5 小结 | 第58-60页 |
| 5 opeF基因调控机制的研究 | 第60-67页 |
| 5.1 引言 | 第60页 |
| 5.2 实验材料 | 第60-61页 |
| 5.2.1 菌株和质粒 | 第60页 |
| 5.2.2 培养基 | 第60页 |
| 5.2.3 生化试剂 | 第60-61页 |
| 5.2.4 本章节用到的引物 | 第61页 |
| 5.2.5 实验仪器 | 第61页 |
| 5.3 实验方法 | 第61-64页 |
| 5.3.1 RNA的提取 | 第61-62页 |
| 5.3.2 DNaseI处理RNA样品 | 第62页 |
| 5.3.3 RNA浓度和纯度的检测 | 第62-63页 |
| 5.3.4 cDNA的合成 | 第63页 |
| 5.3.5 RT-PCR | 第63-64页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第64-66页 |
| 5.4.1 RNA提取的质量检测 | 第64-65页 |
| 5.4.2 RT-PCR测定opeF基因的表达 | 第65-66页 |
| 5.5 小结 | 第66-67页 |
| 6 结语与创新点 | 第67-69页 |
| 6.1 结语 | 第67-68页 |
| 6.2 创新点 | 第68页 |
| 6.3 未来工作展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 个人简历及在校期间发表的论文 | 第77-78页 |
