| 中文摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 生防细菌中芽孢杆菌的研究现状 | 第12-14页 |
| 1.2 生物膜 | 第14-17页 |
| 1.2.1 细菌生物膜的概念 | 第14页 |
| 1.2.2 细菌生物膜形成动态发展过程 | 第14-16页 |
| 1.2.3 细菌生物膜形成的调控基因 | 第16-17页 |
| 1.2.4 细菌生物膜研究现状 | 第17页 |
| 1.3 抗菌活性 | 第17-20页 |
| 1.3.1 抗菌活性物质简介 | 第17-19页 |
| 1.3.2 芽孢杆菌生物膜形成与芽孢形成的关系 | 第19页 |
| 1.3.3 芽孢杆菌生物膜形成与抗菌活性的关系 | 第19-20页 |
| 1.4 sipW研究进展 | 第20-21页 |
| 1.5 基因打靶技术 | 第21-22页 |
| 1.5.1 同源重组技术 | 第22页 |
| 1.5.2 结合反向筛选标记的两步单交换同源重组 | 第22页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-36页 |
| 2.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 溶液与培养基配制 | 第23-25页 |
| 2.1.2.1 溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.1.2.2 培养基配制 | 第24-25页 |
| 2.1.3 仪器与试剂 | 第25页 |
| 2.1.3.1 主要仪器 | 第25页 |
| 2.1.3.2 生化及分子生物学试剂 | 第25页 |
| 2.2 方法 | 第25-36页 |
| 2.2.1 sipW基因缺失突变株的初步构建 | 第25-34页 |
| 2.2.1.1 sipW基因缺失突变株构建方法设计 | 第25-27页 |
| 2.2.1.2 序列分析 | 第27页 |
| 2.2.1.3 突变引物设计 | 第27页 |
| 2.2.1.4 sipW同源前、后臂的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.1.5 sipWF与sipWB PCR扩增产物单酶切及酶切产物胶回收 | 第28-29页 |
| 2.2.1.6 sipWF与sipWB单酶切产物的连接 | 第29页 |
| 2.2.1.7 sipWF-sipWB与pEASY-T1载体连接 | 第29-30页 |
| 2.2.1.8 sipWF-sipWB-pEASY-T1的转化及验证 | 第30页 |
| 2.2.1.9 sipWF-sipWB的重组质粒和自杀质粒PMUTin4的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.1.10 sipWF-sipWB-pEASY-T1与PMUTin4质粒的双酶切 | 第31页 |
| 2.2.1.11 sipWF-sipWB-pEASY-T1重组质粒与PMUTin4质粒的双酶切产物的连接 | 第31-32页 |
| 2.2.1.12 sipWF-sipWB-pEASY-T1转化E. coli T1及验证 | 第32页 |
| 2.2.1.13 sipWF-sipWB-pEASY-T1重组质粒的提取及验证 | 第32页 |
| 2.2.1.14 B. amyloliquefaciens PEBA20感受态的制备 | 第32页 |
| 2.2.1.15 sipWF-sipWB-pEASY-T1质粒电转化 | 第32-33页 |
| 2.2.1.16 红霉素筛选获得重组的B. amyloliquefaciens PEBA20菌体 | 第33页 |
| 2.2.1.17 重组菌株验证 | 第33-34页 |
| 2.2.2 B. amyloliquefaciens PEBA20 sipW基因缺失突变株生物膜表型测定 | 第34页 |
| 2.2.2.1 sipW基因缺失突变株固气界面生物膜表型测定 | 第34页 |
| 2.2.2.2 sipW基因缺失突变株液气界面生物膜表型测定 | 第34页 |
| 2.2.3 B. amyloliquefaciens PEBA20 sipW基因缺失突变株抑菌活性的测定 | 第34-36页 |
| 2.2.3.1 指示真菌和指示细菌的培养 | 第34页 |
| 2.2.3.2 野生株和sipW基因缺失突变株无菌发酵滤液的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.3.3 sipW基因缺失突变株对指示真菌抑菌活性的测定 | 第35页 |
| 2.2.3.4 sipW基因缺失突变株对指示细菌抑菌活性的测定 | 第35页 |
| 2.2.3.5 sipW基因缺失突变株菌活体抑菌活性的检测 | 第35-36页 |
| 2.2.4 sipW基因缺失突变株芽孢及菌体形态特征测定 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-53页 |
| 3.1 B. amyloliquefaciens PEBA20 sipW基因缺失突变株的构建 | 第36-40页 |
| 3.1.1 同源前臂sipWF与同源后臂sipWB的PCR扩增 | 第36-37页 |
| 3.1.2 同源前臂sipWF与同源后臂sipWB的单酶切及连接 | 第37页 |
| 3.1.3 sipWF-sipWB连接产物的克隆 | 第37-38页 |
| 3.1.4 sipWF-sipWB与PMUTin4酶切产物的连接及重组质粒的克隆 | 第38页 |
| 3.1.5 sipWF-sipWB-PMUTin4重组质粒电转化至解淀粉芽孢杆菌PEBA20 | 第38-39页 |
| 3.1.6 sipW基因序列分析 | 第39-40页 |
| 3.2 B. amyloliquefaciens PEBA20 sipW基因缺失突变株的生物膜形态测定 | 第40-46页 |
| 3.2.1 气液界面生物膜形态 | 第40-44页 |
| 3.2.2 固气界面生物膜形态测定 | 第44-46页 |
| 3.3 抑菌活性的测定 | 第46-51页 |
| 3.3.1 B. amyloliquefaciens PEBA20 sipW基因缺失突变株发酵液抑菌活性的测定 | 第46-50页 |
| 3.3.1.1 B. amyloliquefaciens PEBA20 sip W基因缺失突变株发酵液对植物真菌性病害抑菌活性的测定 | 第46-48页 |
| 3.3.1.2 B. amyloliquefaciens PEBA20 sip W基因缺失突变株发酵液对植物病原细菌性病害抑菌活性的测定 | 第48-50页 |
| 3.3.2 B. amyloliquefaciens PEBA20野生型菌株和sipW基因缺失突变株菌活体对真菌性病害抑菌活性的测定 | 第50-51页 |
| 3.4 sipW基因缺失突变株芽孢及菌体形态测定 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 4.1 B. amyloliquefaciens PEBA20 sipW基因缺失突变株的构建 | 第53-54页 |
| 4.1.1 sipW基因的确定 | 第53页 |
| 4.1.2 PMUTin4自杀质粒的选择 | 第53页 |
| 4.1.3 外源DNA导入宿主细胞 | 第53-54页 |
| 4.1.4 转化子筛选和鉴定 | 第54页 |
| 4.2 B. amyloliquefaciens PEBA20 sipW基因缺失突变株的形态生理学测定 | 第54-55页 |
| 4.2.1 sipW基因缺失突变株生物膜检测 | 第54-55页 |
| 4.2.2 sipW基因缺失突变株抑菌活性检测 | 第55页 |
| 4.2.3 sipW基因缺失突变株芽孢菌体检测 | 第55页 |
| 5 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
