| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 植物病毒病的危害及其防治 | 第11-13页 |
| 1.2 抗烟草花叶病毒活性蛋白的研究现状 | 第13-15页 |
| 1.3 Y3蛋白研究现状 | 第15-16页 |
| 1.4 酵母双杂交系统的原理及在蛋白互作中的应用 | 第16-18页 |
| 1.5 研究内容与创新点 | 第18-21页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第18-19页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第19页 |
| 1.5.3 试验创新点 | 第19-21页 |
| 第2章 蛋白Y3基因c DNA的克隆和序列分析 | 第21-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌种 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第21-22页 |
| 2.1.3 生物信息软件及网络资源 | 第22页 |
| 2.1.4 主要试剂及试剂盒 | 第22页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 y3基因cDNA序列扩增用引物 | 第23页 |
| 2.2.2 毛头鬼伞总RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.3 总RNA中残余DNA的去除 | 第24页 |
| 2.2.4 细菌感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.5 PCR扩增蛋白y3基因cDNA序列 | 第25-26页 |
| 2.2.6 PCR扩增产物的电泳和纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.7 蛋白y3基因cDNA序列克隆载体的构建 | 第27页 |
| 2.2.8 大肠杆菌DH5α感受态细胞的转化 | 第27页 |
| 2.2.9 重组质粒DNA的PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.10 基因克隆产物的序列测定 | 第28页 |
| 2.2.11 蛋白y3基因cDNA序列的推测与分析 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-32页 |
| 2.3.1 毛头鬼伞总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.3.2 Y3蛋白cDNA序列RT-PCR扩增结果 | 第28-29页 |
| 2.3.3 重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.4 蛋白y3基因cDNA序列测序结果 | 第30-31页 |
| 2.3.5 序列同源性分析及氨基酸比对 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第32-33页 |
| 第3章 烟草花叶病毒外壳蛋白（TMV CP）基因cDNA的克隆和序列分析 | 第33-41页 |
| 3.1 试验材料 | 第33页 |
| 3.1.1 试验材料及菌种 | 第33页 |
| 3.1.2 主要仪器设备、生物信息软件及网络资源 | 第33页 |
| 3.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第33页 |
| 3.1.4 主要试剂的配制 | 第33页 |
| 3.2 试验方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1 CP基因cDNA序列扩增用引物 | 第33-34页 |
| 3.2.2 烟草花叶病毒（TMV）总RNA的提取 | 第34页 |
| 3.2.3 TMV总RNA中残余DNA的去除 | 第34页 |
| 3.2.4 细菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 3.2.5 RT-PCR扩增蛋白CP基因cDNA序列 | 第34-35页 |
| 3.2.6 PCR扩增产物的电泳和纯化 | 第35页 |
| 3.2.7 蛋白CP基因cDNA序列克隆载体的构建 | 第35页 |
| 3.2.8 大肠杆菌DH5α感受态细胞的转化 | 第35页 |
| 3.2.9 重组质粒的PCR鉴定和测序 | 第35-36页 |
| 3.2.10 蛋白CP基因cDNA序列的推测与分析 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-40页 |
| 3.3.1 TMV总RNA的提取 | 第36页 |
| 3.3.2 蛋白CP基因cDNA序列RT-PCR扩增结果 | 第36-37页 |
| 3.3.3 TMV CP基因重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.4 TMV CP基因cDNA序列测序结果 | 第38页 |
| 3.3.5 CP cDNA序列同源性分析及氨基酸比对 | 第38-40页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第40-41页 |
| 第4章 诱饵载体及猎物载体的构建 | 第41-53页 |
| 4.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 试验菌种和载体 | 第41页 |
| 4.1.2 主要仪器与设备 | 第41页 |
| 4.1.3 生物信息软件及网络资源 | 第41页 |
| 4.1.4 主要试剂及试剂盒 | 第41页 |
| 4.1.5 主要试剂的配制 | 第41-42页 |
| 4.2 试验方法 | 第42-46页 |
| 4.2.1 质粒pGBKT7、pGADT7的转化和提取 | 第42-43页 |
| 4.2.2 提取质粒pGBKT7、pGADT7的电泳检测 | 第43页 |
| 4.2.3 y3基因cDNA序列与质粒pGBKT7的双酶切 | 第43页 |
| 4.2.4 CP基因cDNA序列与质粒pGADT7的双酶切 | 第43-44页 |
| 4.2.5 双酶切产物的纯化和酶连 | 第44页 |
| 4.2.6 细菌感受态细胞的制备和转化 | 第44页 |
| 4.2.7 重组质粒的PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 4.2.8 蛋白y3基因及蛋白CP基因cDNA序列的测定和分析 | 第45页 |
| 4.2.9 重组质粒的双酶切验证 | 第45-46页 |
| 4.3 结果与分析 | 第46-52页 |
| 4.3.1 质粒pGBKT7、pGADT7的提取 | 第46页 |
| 4.3.2 y3基因cDNA序列与质粒pGBKT7的双酶切结果 | 第46-48页 |
| 4.3.3 CP基因cDNA序列与质粒pGADT7的双酶切结果 | 第48-50页 |
| 4.3.4 重组质粒的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| 4.3.5 重组质粒的双酶切验证 | 第51-52页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第52-53页 |
| 第5章 酵母双杂交系统验证Y3与CP蛋白的相互作用 | 第53-69页 |
| 5.1 试验材料 | 第53-54页 |
| 5.1.1 菌种和质粒 | 第53页 |
| 5.1.2 主要仪器与设备 | 第53页 |
| 5.1.3 生物信息软件及网络资源 | 第53页 |
| 5.1.4 主要试剂及试剂盒 | 第53页 |
| 5.1.5 主要试剂的配制 | 第53-54页 |
| 5.2 试验方法 | 第54-60页 |
| 5.2.1 酵母感受态细胞的制备 | 第54-55页 |
| 5.2.2 诱饵载体pGBKT7-y3和及猎物载体pGADT7-CP转化酵母AH109感受态及对宿主菌毒性检测 | 第55-56页 |
| 5.2.3 诱饵载体及猎物载体对酵母AH109转录自激活活性检测 | 第56-57页 |
| 5.2.4 Western blot检测Y3、CP蛋白在酵母细胞中的表达 | 第57-58页 |
| 5.2.5 酵母细胞内验证Y3与CP蛋白相互作用 | 第58-60页 |
| 5.3 结果与分析 | 第60-68页 |
| 5.3.1 p GBKT7-y3转化酵母AH109感受态筛选转化子 | 第60页 |
| 5.3.2 p GADT7-CP转化酵母AH109感受态筛选转化子 | 第60-61页 |
| 5.3.3 诱饵载体及猎物载体转化酵母AH109的PCR验证 | 第61-62页 |
| 5.3.4 诱饵载体及猎物载体对宿主菌的毒性检测 | 第62页 |
| 5.3.5 诱饵载体及猎物载体对酵母AH109转录自激活活性检测 | 第62-65页 |
| 5.3.6 融合蛋白在酵母细胞中的表达 | 第65页 |
| 5.3.7 酵母细胞内验证Y3与CP蛋白相互作用 | 第65-66页 |
| 5.3.8 共转化酵母质粒的PCR验证 | 第66-67页 |
| 5.3.9 pGBKT7-y3诱饵载体和pGADT7-CP猎物载体共转化对宿主菌毒性检测 | 第67-68页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第68-69页 |
| 第6章 结论与展望 | 第69-72页 |
| 6.1 结论 | 第69-70页 |
| 6.1.1 蛋白Y3与CP基因c NA序列的克隆和分析 | 第69页 |
| 6.1.2 pGBKT7-y3诱饵载体和pGADT7-CP猎物载体的构建 | 第69-70页 |
| 6.1.3 Y3与CP蛋白的互作检测 | 第70页 |
| 6.2 展望 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
