| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词及注解 | 第6-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-25页 |
| 1.1 氨基糖苷类药物简介 | 第10-13页 |
| 1.2 小单孢菌研究简介 | 第13页 |
| 1.3 庆大霉素 | 第13-23页 |
| 1.3.1 庆大霉素发现及其结构特征 | 第13-15页 |
| 1.3.2 庆大霉素药理活性 | 第15-16页 |
| 1.3.3 庆大霉素产生菌改良研究 | 第16页 |
| 1.3.4 庆大霉素生物合成研究 | 第16-21页 |
| 1.3.5 庆大霉素发酵研究 | 第21页 |
| 1.3.6 庆大霉素提取精制研究 | 第21-22页 |
| 1.3.7 庆大霉素检测方法研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 选题依据及研究内容 | 第23-25页 |
| 1.4.1 选题依据 | 第23页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 材料和方法 | 第25-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-30页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第25-27页 |
| 2.1.2 培养基 | 第27页 |
| 2.1.3 试剂 | 第27-30页 |
| 2.1.3.1 主要试剂和工具酶 | 第27-28页 |
| 2.1.3.2 主要溶液与缓冲液 | 第28-29页 |
| 2.1.3.3 抗生素 | 第29-30页 |
| 2.1.4 仪器和设备 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-40页 |
| 2.2.1 碱裂解法提取小量大肠杆菌质粒 | 第30-31页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第31-32页 |
| 2.2.3 DNA酶切 | 第32页 |
| 2.2.4 PCR扩增反应 | 第32-33页 |
| 2.2.4.1 PCR反应体系 | 第32页 |
| 2.2.4.2 PCR反应程序 | 第32-33页 |
| 2.2.5 DNA片段胶回收 | 第33页 |
| 2.2.6 单酶切DNA片段去磷酸化 | 第33-34页 |
| 2.2.7 酶连 | 第34页 |
| 2.2.8 绛红小单孢菌基因组DNA提取 | 第34-35页 |
| 2.2.9 DNA琼脂糖胶电泳 | 第35页 |
| 2.2.10 大肠杆菌与绛红小单孢菌的接合转移 | 第35-36页 |
| 2.2.11 绛红小单孢菌摇瓶发酵 | 第36页 |
| 2.2.12 庆大霉素生物效价测定 | 第36-37页 |
| 2.2.12.1 指示菌 | 第36页 |
| 2.2.12.2 管碟法 | 第36-37页 |
| 2.2.13 庆大霉素发酵液体处理与产物提取 | 第37-38页 |
| 2.2.14 代谢产物分析 | 第38页 |
| 2.2.14.1 TLC分析法 | 第38页 |
| 2.2.14.2 质谱分析法 | 第38页 |
| 2.2.14.3 HPLC分析法 | 第38页 |
| 2.2.15 沙土管制备 | 第38-39页 |
| 2.2.16 菌种筛选 | 第39-40页 |
| 2.2.16.1 菌种筛选流程 | 第39页 |
| 2.2.16.2 单孢子悬液的制备 | 第39页 |
| 2.2.16.3 单菌落菌落分离制备 | 第39页 |
| 2.2.16.4 循环筛选方法 | 第39-40页 |
| 第三章 庆大霉素Cla高产工程菌构建 | 第40-51页 |
| 3.1 菌种选育 | 第40-43页 |
| 3.1.1 出发菌的确定及发酵单位检测 | 第40页 |
| 3.1.2 出发菌次级代谢产物分析 | 第40-43页 |
| 3.2 庆大霉素Cla高产工程菌的构建 | 第43-48页 |
| 3.2.1 同源重组质粒pFD308的验证 | 第43-44页 |
| 3.2.2 构建绛红小单孢菌genK阻断工程菌 | 第44-45页 |
| 3.2.2.1 单交换菌株的筛选 | 第44-45页 |
| 3.2.2.2 genK阻断工程菌的筛选 | 第45页 |
| 3.2.3 绛红小单孢菌GbK110的发酵及其代谢产物分析 | 第45-48页 |
| 3.2.3.1 GbK110的发酵单位检测 | 第45-46页 |
| 3.2.3.2 GbK110的代谢产物TLC分析 | 第46页 |
| 3.2.3.3 GbK110的代谢产物质谱分析 | 第46-47页 |
| 3.2.3.4 GbK110代谢产物HPLC分析 | 第47-48页 |
| 3.3 菌株GbK110稳定性考察 | 第48页 |
| 3.3.1 传代稳定性考察 | 第48页 |
| 3.3.2 斜面冰箱保藏稳定性考察 | 第48页 |
| 3.4 菌株GbK110发酵考察 | 第48-50页 |
| 3.4.1 摇瓶接种量的考察 | 第48-49页 |
| 3.4.2 碳源含量的考察 | 第49页 |
| 3.4.3 摇瓶需氧量的考察 | 第49-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 庆大霉素A工程菌的构建 | 第51-59页 |
| 4.1 重组质粒pGD14的构建 | 第51-54页 |
| 4.1.1 基因genD1同源交换臂的PCR扩增 | 第51-52页 |
| 4.1.2 同源重组质粒pGD14的构建与验证 | 第52-54页 |
| 4.2 genD1基因缺失突变株的筛选 | 第54-56页 |
| 4.2.1 单交换菌株的筛选 | 第54-55页 |
| 4.2.2 genD1阻断突变菌的筛选 | 第55-56页 |
| 4.3 绛红小单孢菌GD1989的发酵及其代谢产物分析 | 第56-57页 |
| 4.3.1 GD1989的发酵单位检测 | 第56页 |
| 4.3.2 GD1989的代谢产物TLC分析 | 第56页 |
| 4.3.3 GD1989的代谢产物质谱分析 | 第56-57页 |
| 4.4 小结 | 第57-59页 |
| 第五章 genX基因阻断工程菌的构建 | 第59-66页 |
| 5.1 重组质粒pGX3的构建 | 第59-62页 |
| 5.1.1 基因genX同源交换臂的PCR扩增 | 第59-60页 |
| 5.1.2 重组质粒pGX3的构建与验证 | 第60-62页 |
| 5.2 genX基因缺失突变株的筛选 | 第62-63页 |
| 5.2.1 单交换菌株的筛选 | 第62-63页 |
| 5.2.2 genX基因缺失突变株的筛选 | 第63页 |
| 5.3 工程菌GX322次级代谢产物分析 | 第63-65页 |
| 5.3.1 GX322的发酵单位检测 | 第63页 |
| 5.3.2 GX322的代谢产物TLC分析 | 第63-64页 |
| 5.3.3 GX322的代谢产物质谱分析 | 第64页 |
| 5.3.4 GX322代谢产物HPLC分析 | 第64-65页 |
| 5.4 小结 | 第65-66页 |
| 第六章 genP基因阻断工程菌的构建 | 第66-74页 |
| 6.1 重组质粒pZP3的构建 | 第66-69页 |
| 6.1.1 基因genP同源交换臂扩增 | 第66-67页 |
| 6.1.2 重组质粒pZP3的构建与验证 | 第67-69页 |
| 6.2 工程菌KP310的构建 | 第69-72页 |
| 6.2.1 单交换菌株的筛选 | 第69-70页 |
| 6.2.2 genP阻断突变菌KP310的筛选 | 第70-71页 |
| 6.2.3 工程菌KP310代谢产物分析 | 第71-72页 |
| 6.2.3.1 KP310的发酵单位检测 | 第71页 |
| 6.2.3.2 KP310的代谢产物TLC分析 | 第71页 |
| 6.2.3.3 KP310的代谢产物质谱分析 | 第71-72页 |
| 6.3 工程菌GP408的构建 | 第72-73页 |
| 6.3.1 单交换菌株的筛选 | 第72页 |
| 6.3.2 genP阻断突变菌GP408的筛选 | 第72页 |
| 6.3.3 工程菌GP408代谢产物分析 | 第72-73页 |
| 6.3.3.1 GP408的发酵单位检测 | 第72-73页 |
| 6.3.3.2 GP408的代谢产物TLC分析 | 第73页 |
| 6.3.3.3 GP408的代谢产物质谱分析 | 第73页 |
| 6.4 小结 | 第73-74页 |
| 全文总结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 附录 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 个人简历 | 第84页 |