| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 基因治疗概述 | 第12页 |
| 1.2 基因传递体系 | 第12-16页 |
| 1.2.1 非病毒基因传递系统 | 第13-16页 |
| 1.2.1.1 聚乙烯亚胺(PEI) | 第14页 |
| 1.2.1.2 树状高分子聚酰胺-胺(PAMAM) | 第14-15页 |
| 1.2.1.3 聚赖氨酸(PLL) | 第15-16页 |
| 1.2.1.4 壳聚糖(CS) | 第16页 |
| 1.3 刺激响应性聚阳离子基因载体 | 第16-18页 |
| 1.3.1 pH敏感基因载体 | 第17页 |
| 1.3.2 氧化还原敏感基因载体 | 第17-18页 |
| 1.3.3 温度敏感基因载体 | 第18页 |
| 1.4 阳离子聚合物载体介导基因传递面临的障碍及解决措施 | 第18-21页 |
| 1.4.1 血液循环的稳定性 | 第19页 |
| 1.4.2 靶向细胞摄取 | 第19-20页 |
| 1.4.3 内涵体逃逸 | 第20-21页 |
| 1.4.4 细胞核进入 | 第21页 |
| 1.5 选题思路及研究内容 | 第21-23页 |
| 1.5.1 选题思路 | 第21-22页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 酸敏感聚(原酸酯氨基醇)的制备与表征 | 第23-37页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验试剂及仪器 | 第23-25页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.3 实验内容 | 第25-28页 |
| 2.3.1 实验试剂的纯化 | 第25页 |
| 2.3.2 AOE的合成 | 第25-27页 |
| 2.3.3 聚(原酸酯氨基醇)(POEAAs)的合成 | 第27-28页 |
| 2.4 表征方法 | 第28-29页 |
| 2.4.1 核磁共振氢谱(~1H NMR)检测 | 第28页 |
| 2.4.2 凝胶渗透色谱(GPC)检测 | 第28页 |
| 2.4.3 聚(原酸酯氨基醇)(POEAAs)的酸敏感性检测 | 第28-29页 |
| 2.4.3.1 不同pH缓冲溶液的配制 | 第28-29页 |
| 2.4.3.2 POEAAs的酸敏感性检测 | 第29页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第29-36页 |
| 2.5.1 化合物2的~1H NMR图谱分析 | 第29-30页 |
| 2.5.2 AOE的~1H NMR图谱分析 | 第30-31页 |
| 2.5.3 POEAAs的~1H NMR图谱分析 | 第31-32页 |
| 2.5.4 POEAAs的GPC分析 | 第32-33页 |
| 2.5.5 POEAAs的酸敏感性结果分析 | 第33-36页 |
| 2.6 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 POEAAs/DNA复合物的制备与表征 | 第37-53页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验试剂及仪器 | 第37-38页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-44页 |
| 3.3.1 质粒DNA的大量制备与纯化 | 第38-40页 |
| 3.3.1.1 E.coliDH5α的培养 | 第39页 |
| 3.3.1.2 质粒的提取 | 第39-40页 |
| 3.3.2 POEAAs/DNA复合物的制备 | 第40-41页 |
| 3.3.3 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验 | 第41页 |
| 3.3.4 EB排阻实验 | 第41页 |
| 3.3.5 粒径和Zeta电位测定 | 第41-42页 |
| 3.3.6 DNase Ⅰ酶解实验 | 第42页 |
| 3.3.7 肝素置换实验 | 第42页 |
| 3.3.8 BSA蛋白吸附实验 | 第42-44页 |
| 3.3.9 复合物释放DNA实验 | 第44页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第44-52页 |
| 3.4.1 琼脂糖凝胶电泳阻滞实验 | 第44-45页 |
| 3.4.2 EB排阻实验 | 第45-46页 |
| 3.4.3 粒径和Zeta电位的测量 | 第46-47页 |
| 3.4.4 DNase Ⅰ酶解实验 | 第47-48页 |
| 3.4.5 肝素置换实验 | 第48-49页 |
| 3.4.6 BSA蛋白吸附实验 | 第49-50页 |
| 3.4.7 复合物释放DNA实验 | 第50-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 聚阳离子载体POEAAs介导体外细胞转染及细胞毒性研究 | 第53-62页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 实验试剂及仪器 | 第53-54页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第53-54页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-57页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第54-55页 |
| 4.3.2 细胞毒性实验 | 第55-56页 |
| 4.3.3 POEAAs介导293T细胞转染实验 | 第56-57页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第57-61页 |
| 4.4.1 POEAAs的细胞毒性 | 第57-58页 |
| 4.4.2 POEAAs介导293T细胞转染 | 第58-61页 |
| 4.5 本章小结 | 第61-62页 |
| 主要结论与展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第73页 |
