| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号及缩略词 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 前言 | 第11-12页 |
| 1.2 丝状真菌细胞壁结构特点 | 第12页 |
| 1.3 灰葡萄孢菌的基因功能研究方法及进展 | 第12-18页 |
| 1.3.1 T-DNA标签(T-DNA tagging)技术 | 第13-15页 |
| 1.3.2 基因敲除(gene knockout)技术 | 第15-18页 |
| 1.4 选题意义 | 第18-19页 |
| 1.5 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 构建灰葡萄孢T-DNA突变体库 | 第20-33页 |
| 2.1 前言 | 第20页 |
| 2.2 材料 | 第20-23页 |
| 2.2.1 菌株 | 第20页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.3 抗生素和培养基 | 第21-23页 |
| 2.3 方法 | 第23-25页 |
| 2.3.1 菌株的活化和培养 | 第23页 |
| 2.3.2 农杆菌介导的灰葡萄孢的转化[18] | 第23-24页 |
| 2.3.3 转化子的分离纯化及保种 | 第24-25页 |
| 2.3.4 菌株的生物学特性以及致病性研究 | 第25页 |
| 2.4 结果与分析 | 第25-31页 |
| 2.4.1 灰葡萄孢突变株的获得 | 第25-26页 |
| 2.4.2 灰葡萄孢突变株的生物学特性分析 | 第26-31页 |
| 2.5 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 细胞壁完整性缺陷突变株的筛选及T-DNA插入位点分析 | 第33-55页 |
| 3.1 前言 | 第33页 |
| 3.2 材料 | 第33-35页 |
| 3.2.1 菌株 | 第33页 |
| 3.2.2 试剂和仪器 | 第33-34页 |
| 3.2.3 抗生素和培养基 | 第34-35页 |
| 3.3 方法 | 第35-44页 |
| 3.3.1 利用CFW对突变株的筛选 | 第35页 |
| 3.3.2 突变株的分子鉴定 | 第35-44页 |
| 3.4 结果与分析 | 第44-53页 |
| 3.4.1 T-DNA插入灰葡萄孢细胞壁完整性缺陷突变株的获得 | 第44-45页 |
| 3.4.2 突变株的T-DNA插入位点鉴定 | 第45-53页 |
| 3.5 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 灰葡萄孢T-DNA突变株的分子鉴定 | 第55-71页 |
| 4.1 前言 | 第55页 |
| 4.2 材料 | 第55-57页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第55页 |
| 4.2.2 试剂 | 第55-56页 |
| 4.2.3 Southern blotting所需缓冲液 | 第56-57页 |
| 4.3 方法 | 第57-66页 |
| 4.3.1 RT-PCR检测T-DNA插入突变基因的表达情况 | 第57-61页 |
| 4.3.2 T-DNA插入突变株的Southern blotting分析 | 第61-66页 |
| 4.4 结果与分析 | 第66-69页 |
| 4.4.1 T-DNA插入突变基因的表达情况 | 第66页 |
| 4.4.2 T-DNA插入突变株的Southern blotting分析 | 第66-69页 |
| 4.5 讨论 | 第69-71页 |
| 第五章 灰葡萄孢突变株目标基因的互补及基因功能的研究 | 第71-87页 |
| 5.1 前言 | 第71页 |
| 5.2 材料 | 第71-72页 |
| 5.2.1 菌株与质粒 | 第71-72页 |
| 5.2.2 试剂 | 第72页 |
| 5.2.3 抗生素和培养基 | 第72页 |
| 5.3 方法 | 第72-78页 |
| 5.3.1 突变株目的基因的遗传互补 | 第72-77页 |
| 5.3.2 互补菌株的生物学特性分析 | 第77页 |
| 5.3.3 番茄叶片感染实验 | 第77-78页 |
| 5.3.4 几丁质含量的测定 | 第78页 |
| 5.3.5 菌体染色观察几丁质含量的变化 | 第78页 |
| 5.4 结果与分析 | 第78-85页 |
| 5.4.1 突变株目的基因的遗传互补 | 第78-82页 |
| 5.4.2 互补菌株的获得及生物学特性分析研究 | 第82-83页 |
| 5.4.3 致病性观察 | 第83-84页 |
| 5.4.4 几丁质含量的变化 | 第84-85页 |
| 5.5 讨论 | 第85-87页 |
| 第六章 总结与展望 | 第87-90页 |
| 6.1 总结 | 第87-88页 |
| 6.2 展望 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第97页 |
