| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 第一章 引言 | 第9-24页 |
| 第一节 铜绿假单胞菌的生物学特征 | 第10-11页 |
| 第二节 铜绿假单胞菌的两类毒力因子 | 第11-13页 |
| 1.2.1 细胞外毒力因子 | 第11-13页 |
| 1.2.1.1 绿脓菌素 | 第11-12页 |
| 1.2.1.2 外毒素A | 第12页 |
| 1.2.1.3 磷脂酶C | 第12页 |
| 1.2.1.4 弹性蛋白酶 | 第12页 |
| 1.2.1.5 Ⅲ型分泌系统效应因子 | 第12-13页 |
| 1.2.2 细胞表面附属毒力因子 | 第13页 |
| 1.2.2.1 鞭毛和菌毛 | 第13页 |
| 1.2.2.2 脂多糖 | 第13页 |
| 第三节 铜绿假单胞的耐药性调控机制 | 第13-16页 |
| 1.3.1 细菌的细胞膜通透性降低 | 第14页 |
| 1.3.2 药物主动外排泵系统 | 第14-15页 |
| 1.3.3 产生降解或钝化抗生素的酶 | 第15页 |
| 1.3.4 抗生素作用靶点的改变 | 第15页 |
| 1.3.5 生物被膜的形成 | 第15-16页 |
| 第四节 铜绿假单胞菌内的绿脓杆菌素 | 第16-19页 |
| 1.4.1 三类绿脓杆菌素 | 第16-17页 |
| 1.4.1.1 R型绿脓杆菌素 | 第16页 |
| 1.4.1.2 F型绿脓杆菌素 | 第16-17页 |
| 1.4.1.3 S型绿脓杆菌素 | 第17页 |
| 1.4.2 绿脓杆菌素合成的调控 | 第17-18页 |
| 1.4.3 绿脓杆菌素的相关研究 | 第18-19页 |
| 第五节 铜绿假单胞菌内的RNA酶 | 第19-22页 |
| 1.5.1 细菌内的RNA酶及其与细菌致病性的关系 | 第19页 |
| 1.5.2 NanoRNA酶 (NanoRNase) | 第19-20页 |
| 1.5.3 在铜绿假单胞菌中关于Orn的研究 | 第20-22页 |
| 第六节 本文研究的目的意义及技术路线 | 第22-24页 |
| 1.6.1 本研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 1.6.2 本项研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-57页 |
| 第一节 实验材料 | 第24-45页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和引物 | 第24-26页 |
| 2.1.2 酶与试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第27页 |
| 2.1.4 实验方法 | 第27-45页 |
| 2.1.4.1 培养基及试剂配置 | 第27-30页 |
| 2.1.4.2 铜绿假单胞菌基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.1.4.3 PCR扩增 | 第31页 |
| 2.1.4.4 PCR产物纯化 | 第31-32页 |
| 2.1.4.5 质粒的小量提取 | 第32-33页 |
| 2.1.4.6 酶切 | 第33页 |
| 2.1.4.7 酶切产物回收 | 第33-34页 |
| 2.1.4.8 DNA片段连接 | 第34页 |
| 2.1.4.9 大肠杆菌化学感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.1.4.10 大肠杆菌感受态细胞的化学转化 | 第35页 |
| 2.1.4.11 制备铜绿假单胞菌的电转化感受态细胞，并进行电转化 | 第35-36页 |
| 2.1.4.12 细菌的基因敲除 | 第36-38页 |
| 2.1.4.13 细菌的最低抑菌浓度(MIC)的测定 | 第38页 |
| 2.1.4.14 prtR基因定点突变(S162A) | 第38-39页 |
| 2.1.4.15 RNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.1.4.16 RNA反转录为cDNA | 第40-41页 |
| 2.1.4.17 Real-Time PCR | 第41-42页 |
| 2.1.4.18 Western Blot | 第42-43页 |
| 2.1.4.19 RNA测序和数据分析 | 第43-45页 |
| 第三章 实验结果与讨论分析 | 第45页 |
| 第一节 结果 | 第45-55页 |
| 3.1.1 Orn在细菌对喹诺酮类抗生素耐药中起重要作用 | 第45页 |
| 3.1.2 orn突变株内绿脓杆菌素基因的表达上调使得细菌对环丙沙星的敏感性增加 | 第45-49页 |
| 3.1.3 由于orn的突变导致PrtR蛋白稳定性降低 | 第49-51页 |
| 3.1.4 在orn突变株中过表达PrtRS162A可以增加细菌对环丙沙星的耐药性 | 第51-52页 |
| 3.1.5 在orn突变株中RecA对PrtR蛋白的自体降解加速起重要作用 | 第52-55页 |
| 第二节 讨论展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-84页 |
| 个人简历 | 第84页 |
