| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 棉纤维伸长发育及相关基因研究 | 第11-13页 |
| 1.1 棉纤维细胞发育的生理过程 | 第11-12页 |
| 1.2 棉纤维发育相关基因的克隆 | 第12-13页 |
| 2 基因克隆的方法 | 第13-21页 |
| 2.1 通过遗传表型分析 | 第13-14页 |
| 2.1.1 转座子标签技术 | 第14页 |
| 2.1.2 基于图谱的定位克隆技术(map-based cloning) | 第14页 |
| 2.2 通过同源序列技术克隆相关基因 | 第14页 |
| 2.3 从大基因组区域直接分离编码序列 | 第14-15页 |
| 2.3.1 cDNA文库差异筛选法 | 第15页 |
| 2.3.2 纤维cDNA文库随机测序 | 第15页 |
| 2.3.3 利用比较基因组学克隆相关基因 | 第15页 |
| 2.3.4 热不对称交错PCR(Thermal asymmetric interlacaed PCR,Tail-PCR) | 第15页 |
| 2.4 通过研究mRNA差异表达筛选克隆基因 | 第15-19页 |
| 2.4.1 mRNA差异展示(mRNAdifferential display,DDRT-PCR) | 第15-17页 |
| 2.4.2 RDA代表性差异分析(representational difference analysis,RDA) | 第17-18页 |
| 2.4.3 抑制性扣除杂交(suppression subtractive hybridization,SSH) | 第18页 |
| 2.4.4 差异消减显示(differential subtraction display,DSD) | 第18页 |
| 2.4.5 cDNA-AFLP法 | 第18-19页 |
| 2.5 基于表达序列标签(EST)的基因克隆 | 第19-20页 |
| 2.5.1 EST电子杂交基因克隆 | 第19页 |
| 2.5.2 EST结合PCR技术基因克隆 | 第19-20页 |
| 2.6 应用DNA芯片技术筛选新基因 | 第20-21页 |
| 第二部分 研究报告 | 第21-75页 |
| 1 材料和方法 | 第22-38页 |
| 1.1 植物材料 | 第22页 |
| 1.2 RNA的提取与反转录 | 第22-24页 |
| 1.2.1 RNA的提取 | 第22-24页 |
| 1.2.2 RNA反转录 | 第24页 |
| 1.3 差异显示PCR(DDRT-PCR) | 第24-27页 |
| 1.3.1 差异显示PCR引物 | 第24-25页 |
| 1.3.2 cDNA片段的扩增 | 第25-26页 |
| 1.3.3 PAGE分析 | 第26-27页 |
| 1.4 差异片段的回收与再扩增 | 第27-28页 |
| 1.4.1 差异片段的回收 | 第27页 |
| 1.4.2 再扩增 | 第27-28页 |
| 1.4.3 琼脂糖凝胶DNA片段的回收 | 第28页 |
| 1.5 cDNA差异条带的分子克隆 | 第28-30页 |
| 1.5.1 TA克隆连接 | 第28页 |
| 1.5.2 转化 | 第28-30页 |
| 1.6 RT-PCR | 第30-32页 |
| 1.6.1 RNA提取 | 第30页 |
| 1.6.2 RT-PCR引物 | 第30页 |
| 1.6.3 RT-PCR | 第30-32页 |
| 1.7 cDNA全长获得及序列分析 | 第32页 |
| 1.7.1 基因全长序列的获得 | 第32页 |
| 1.7.2 序列分析软件 | 第32页 |
| 1.8 qPCR | 第32-33页 |
| 1.9 基因编码产物的亚细胞定位研究 | 第33页 |
| 1.10 Southern blotting | 第33-38页 |
| 1.10.1 DNA的提取 | 第33-34页 |
| 1.10.2 基因组DNA的酶切 | 第34-35页 |
| 1.10.3 Southern印迹 | 第35页 |
| 1.10.4 DIG标记探针 | 第35-36页 |
| 1.10.5 杂交 | 第36页 |
| 1.10.6 洗膜与显色 | 第36页 |
| 1.10.7 试剂及其配制 | 第36-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-69页 |
| 2.1 棉花纤维初始发育阶段的表达分析 | 第38-46页 |
| 2.1.1 差异显示 | 第38-39页 |
| 2.1.2 差异片段的再扩增 | 第39页 |
| 2.1.3 GO分析结果 | 第39-40页 |
| 2.1.4 RT-PCR结果 | 第40-46页 |
| 2.2 GhTLP2的克隆与表达分析 | 第46-55页 |
| 2.2.1 GhTLP2的克隆和序列生物信息学分析 | 第46-50页 |
| 2.2.2 棉花GhTLP2基因与其他物同源基因的聚类分析 | 第50-52页 |
| 2.2.3 GhTLP2的表达分析 | 第52-53页 |
| 2.2.4 GhTLP2基因编码产物的亚细胞定位 | 第53-54页 |
| 2.2.5 GhTLP2基因组杂交分析 | 第54-55页 |
| 2.3 GhTLP7的克隆和功能研究 | 第55-61页 |
| 2.3.1 GhTLP7 cDNA全长获得及序列分析 | 第55页 |
| 2.3.2 棉花GhTLP7基因与其他物同源基因的聚类分析 | 第55-58页 |
| 2.3.3 GhTLP7的表达分析 | 第58-59页 |
| 2.3.4 GhTLP7基因编码产物的亚细胞定位 | 第59-60页 |
| 2.3.5 GhTLP7基因组杂交分析 | 第60-61页 |
| 2.4 GhTLP1的全长序列测定及生物信息学分析 | 第61-69页 |
| 2.4.1 GhTLP1的全序列测定及序列分析 | 第61-62页 |
| 2.4.2 GhTLP1全长的生物信息学分析 | 第62-66页 |
| 2.4.3 棉花GhTLP1基因与其他物种同源基因的聚类分析 | 第66-67页 |
| 2.4.4 棉花三个TLP基因编码蛋白与其他物种同源蛋白的聚类分析 | 第67-69页 |
| 3 讨论 | 第69-75页 |
| 3.1 mRNA差异显示法(DDRT-PCR) | 第69-70页 |
| 3.2 材料的选择 | 第70-73页 |
| 3.3 Tubby基因家族 | 第73-75页 |
| 全文总结 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-87页 |
| 附录：DDRT所得EST序列 | 第87-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
