| 中文摘要 | 第3-4页 |
| 英文摘要 | 第4-5页 |
| 1 绪论 | 第9-22页 |
| 1.1 目的意义 | 第9-10页 |
| 1.2 植物抗病基因的克隆 | 第10-15页 |
| 1.2.1 植物抗病基因的克隆技术 | 第10-11页 |
| 1.2.2 抗病基因克隆的快捷策略 | 第11-15页 |
| 1.3 植物抗真菌病害基因工程的策略 | 第15-16页 |
| 1.3.1 导入植物防卫反应基因增强植物抗病性 | 第15页 |
| 1.3.2 导入降解或抑制病原菌致病因子的基因使植物抗病 | 第15-16页 |
| 1.4 硫堇蛋白的研究与应用 | 第16-17页 |
| 1.4.1 硫堇蛋白 | 第16页 |
| 1.4.2 硫堇蛋白的分类及一级结构特征 | 第16-17页 |
| 1.4.3 硫堇蛋白的功能、作用机理及应用 | 第17页 |
| 1.5 植物几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的研究及其应用 | 第17-19页 |
| 1.5.1 植物几丁质酶的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.5.2 植物几丁质酶的结构特征及分类 | 第18页 |
| 1.5.3 几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的特性、作用机理及应用 | 第18-19页 |
| 1.6 多基因转化策略 | 第19-20页 |
| 1.7 关于西伯利亚蓼的研究 | 第20-22页 |
| 2 西伯利亚蓼抗病基因的克隆、序列分析及表达特性研究 | 第22-51页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 分子生物学及生化试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 寡聚核苷酸引物 | 第22-23页 |
| 2.1.5 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.6 RNA提取缓冲液的配制 | 第24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-51页 |
| 2.2.1 植物材料西伯利亚蓼的处理 | 第24页 |
| 2.2.2 从SSH中分析筛选抗病相关基因EST | 第24页 |
| 2.2.3 西伯利亚蓼总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.4 5'RACE及3'RACE模板的cDNA合成 | 第25页 |
| 2.2.5 西伯利亚蓼硫堇基因的克隆和序列分析 | 第25-28页 |
| 2.2.6 西伯利亚蓼几丁质酶基因的克隆、序列分析 | 第28-30页 |
| 2.2.7 盐胁迫下西伯利亚蓼葡聚糖酶基因的克隆、序列分析 | 第30-31页 |
| 2.2.8 盐胁迫下PsCHI1和PsGLUC1基因在西伯利亚蓼中的表达特性研究 | 第31-32页 |
| 2.2.9 结果与分析 | 第32-47页 |
| 2.2.10 讨论 | 第47-50页 |
| 2.2.11 本章小结 | 第50-51页 |
| 3 快速构建pROKⅡ植物双价表达载体的方法 | 第51-63页 |
| 3.1 材料 | 第51页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 3.1.2 菌株与质粒 | 第51页 |
| 3.1.3 分子生物学及生化试剂 | 第51页 |
| 3.2 试验方法 | 第51-56页 |
| 3.2.1 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第51页 |
| 3.2.2 PsCHI1/pROKⅡ和PsGLUC1/pROKⅡ单价表达载体的构建 | 第51-53页 |
| 3.2.3 PsCHI1-PsGLUC1/pROKⅡ双价载体构建策略 | 第53-56页 |
| 3.3 结果与分析 | 第56-61页 |
| 3.3.1 PsCHI1/pROKⅡ和PsGLUC1/pROKⅡ单价载体质粒的酶切验证 | 第56页 |
| 3.3.2 "中间载体"更换酶切位点法构建双价载体的产物鉴定 | 第56-60页 |
| 3.3.3 35S和Tnos引物PCR方法构建双价载体的产物鉴定 | 第60-61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 4 双价表达载体在烟草中的遗传转化分析 | 第63-70页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第63-64页 |
| 4.1.1 材料 | 第63页 |
| 4.1.2 菌株与质粒 | 第63页 |
| 4.1.3 酶及生化试剂 | 第63页 |
| 4.1.4 储备液的制备 | 第63页 |
| 4.1.5 仪器设备 | 第63-64页 |
| 4.1.6 烟草组织培养所需培养基 | 第64页 |
| 4.1.7 DNA提取缓冲液的配制 | 第64页 |
| 4.2 试验方法 | 第64-66页 |
| 4.2.1 单价载体及双价表达载体转化农杆菌 | 第64-65页 |
| 4.2.2 双价基因烟草的遗传转化 | 第65页 |
| 4.2.3 转基因烟草植株的分子鉴定 | 第65-66页 |
| 4.3 结果与分析 | 第66-69页 |
| 4.3.1 农杆菌重组质粒的PCR鉴定 | 第66-67页 |
| 4.3.2 烟草的遗传转化 | 第67页 |
| 4.3.3 转基因烟草植株的分子鉴定 | 第67-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69页 |
| 4.5 本章小结 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 附录1 构建两个单价载体流程 | 第78-79页 |
| 附录2 "中间载体更换酶切位点法"构建双价载体流程 | 第79-80页 |
| 附录3 "35S和Tnos引物PCR法"构建双价载体流程 | 第80-81页 |
| 附录4 几种植物表达载体35S启动子序列比对 | 第81-82页 |
| 附录5 几种植物表达载体Tnos序列比对 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
