| 目录 | 第3-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 本文缩写词表(Abbreviation) | 第9-10页 |
| 1.绪论 | 第10-25页 |
| 1.1 饲料添加剂及营养酵母蛋白饲料在饲料生产中的应用 | 第10-12页 |
| 1.2 饲料中的植酸盐 | 第12-15页 |
| 1.3 植酸酶及其应用 | 第15-20页 |
| 1.4 植酸酶的基因工程改造 | 第20-23页 |
| 1.5 展望 | 第23-24页 |
| 1.6 本文的研究工作 | 第24-25页 |
| 2.材料与方法 | 第25-35页 |
| 2.1 菌株与质粒 | 第25页 |
| 2.2 分子克隆用酶和试剂 | 第25-26页 |
| 2.3 培养基 | 第26页 |
| 2.4 微生物学技术 | 第26-27页 |
| 2.4.1 菌体的生长 | 第26页 |
| 2.4.2 菌种的保存 | 第26-27页 |
| 2.4.3 平板菌落计数： | 第27页 |
| 2.5 黑曲霉植酸酶发酵产物分析 | 第27-28页 |
| 2.6 分子生物学方法 | 第28-31页 |
| 2.6.1 大肠杆菌中质粒的提取 | 第28页 |
| 2.6.2 酵母染色体的提取 | 第28-29页 |
| 2.6.3 黑曲霉染色体的提取 | 第29页 |
| 2.6.4 DNA纯度和浓度的测定 | 第29页 |
| 2.6.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| 2.6.6 目的基因的克隆 | 第29-30页 |
| 2.6.7 琼脂糖凝胶中DNA片段的回收 | 第30页 |
| 2.6.8 限制性核酸内切酶酶切 | 第30页 |
| 2.6.9 酶切片段的去磷酸化和连接 | 第30页 |
| 2.6.10 大肠杆菌转化 | 第30-31页 |
| 2.6.11 面包酵母YW-006对G418抗性浓度的确定 | 第31页 |
| 2.6.12 酿酒酵母转化方法 | 第31页 |
| 2.7 面包酵母蛋白含量测定 | 第31-32页 |
| 2.8 重组菌株平板点滴试验 | 第32页 |
| 2.9 粗酶液的制备 | 第32页 |
| 2.10 酶活测定方法 | 第32-33页 |
| 2.11 重组菌株YEPD发酵试验 | 第33页 |
| 2.12 重组菌株淀粉水解液发酵试验 | 第33-34页 |
| 2.13 酵母菌自溶试验 | 第34-35页 |
| 3.结果与讨论 | 第35-50页 |
| 3.1 黑曲霉植酸酶发酵试验 | 第35页 |
| 3.2 稳定高效表达黑曲霉植酸酶基因的转化载体的构建 | 第35-40页 |
| 3.2.1 黑曲霉染色体提取 | 第35-36页 |
| 3.2.2 phyA基因的克隆 | 第36-38页 |
| 3.2.3 带有黑曲霉phyA基因的重组质粒pYMIKP-phyA的构建 | 第38-40页 |
| 3.3 高效表达黑曲霉植酸酶基因的重组菌株的构建及其筛选 | 第40-47页 |
| 3.3.1 宿主酵母菌株的选择 | 第41页 |
| 3.3.2 面包酵母YW-006对G418抗性浓度的确定 | 第41-42页 |
| 3.3.3 整合表达黑曲霉植酸酶基因phyA的重组酵母菌株的构建 | 第42页 |
| 3.3.4 高拷贝重组酵母菌株的筛选及验证 | 第42-47页 |
| 3.4 含有phyA基因的重组酵母菌株的淀粉水解液发酵试验 | 第47-48页 |
| 3.5 重组菌株YP-6淀粉水解液发酵产物干燥处理 | 第48-49页 |
| 3.6 小结 | 第49-50页 |
| 全文总结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第56页 |
