| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-24页 |
| ·前言 | 第15页 |
| ·Crc 的发现 | 第15-16页 |
| ·肠杆菌中的CCR 机制 | 第16-17页 |
| ·假单胞菌中的CCR 表象及Crc 蛋白的作用方式 | 第17-20页 |
| ·假单胞菌的烷烃降解途径中的CCR 现象 | 第17-18页 |
| ·假单胞菌中芳香族化合物代谢途径中的CCR 现象 | 第18页 |
| ·假单胞菌中Crc 蛋白的作用方式 | 第18-20页 |
| ·Crc 蛋白对其它代谢途径的影响 | 第20页 |
| ·枯草芽孢杆菌中的CCR 机制 | 第20-21页 |
| ·醋酸钙不动杆菌中的CCR 机制 | 第21页 |
| ·铜绿假单胞菌中小RNA 是碳代谢抑制中的全局调控子 | 第21-22页 |
| ·立题依据及技术路线 | 第22-24页 |
| ·立题依据 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 施氏假单胞菌A1501 中crc 基因的缺失突变和功能互补 | 第24-36页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·酶和化学试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·抗生素 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-30页 |
| ·碱裂解法小量提取细菌质粒 | 第26页 |
| ·基因的PCR 扩增 | 第26-28页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第28页 |
| ·酶切及连接反应 | 第28-29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29-30页 |
| ·三亲本结合实验 | 第30页 |
| ·结果分析 | 第30-34页 |
| ·crc 缺失突变株的构建 | 第30-33页 |
| ·功能互补菌株的构建 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 crc 突变株表型鉴定及Crc 蛋白的表达纯化 | 第36-57页 |
| ·材料 | 第36-40页 |
| ·菌株和质粒 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·酶和化学试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·常用溶液 | 第38页 |
| ·PCR 引物设计 | 第38-40页 |
| ·方法 | 第40-46页 |
| ·生长曲线的测定 | 第40页 |
| ·固氮酶活性的测定 | 第40-41页 |
| ·考马斯亮蓝法测定全细胞的蛋白含量 | 第41页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性分析 | 第41-42页 |
| ·趋化圈实验 | 第42页 |
| ·Biolog 分析野生型与突变株对碳源的利用情况 | 第42页 |
| ·RNA 的提取 | 第42-43页 |
| ·cDNA 链的合成 | 第43-44页 |
| ·荧光实时定量PCR 反应 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的表达与纯化 | 第45-46页 |
| ·变性蛋白SDS-PAGE 电泳 | 第46页 |
| ·结果分析 | 第46-56页 |
| ·P. stutzeri A1501 菌crc 与其它菌中同源基因的进化分析 | 第46-47页 |
| ·野生型、突变株及功能互补菌株生长曲线的测定 | 第47-48页 |
| ·crc 突变对固氮酶活性的影响 | 第48-49页 |
| ·nifH 启动子活性验证载体的构建 | 第49-50页 |
| ·crc 突变对趋化能力的影响 | 第50-51页 |
| ·Biolog 分析野生型与突变株对95 种碳源的代谢谱变化 | 第51-52页 |
| ·RNA 的提取 | 第52-53页 |
| ·施氏假单胞菌中目的基因在诱导条件下的基因表达 | 第53-54页 |
| ·固氮条件下nifH 基因的表达情况分析 | 第54-55页 |
| ·Crc 蛋白的表达与纯化 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 第四章 Crc 在固氮条件下的全局性调控机制研究 | 第57-77页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·菌株 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-59页 |
| ·菌体的制备与收集 | 第57-58页 |
| ·转录组中的实验方法 | 第58页 |
| ·数据分析方法 | 第58-59页 |
| ·实验结果 | 第59-75页 |
| ·野生型及Crc 突变株在固氮条件下转录组分析 | 第59-60页 |
| ·差异表达基因的功能及分类 | 第60-61页 |
| ·氮代谢基因的表达情况 | 第61-63页 |
| ·固氮酶氧保护相关基因的表达情况 | 第63-64页 |
| ·代谢途径和运输系统全局的变化 | 第64-65页 |
| ·氨基酸代谢系统的变化 | 第65-66页 |
| ·crc 突变对聚羟基丁酸酯合成途径的影响 | 第66页 |
| ·crc 突变对反硝化基因表达的影响 | 第66-68页 |
| ·趋化及运动相关基因的表达情况 | 第68-72页 |
| ·Crc 靶标基因结合位点的分析 | 第72-74页 |
| ·小RNA | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| 第五章 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简历 | 第84页 |
