| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第17-43页 |
| 1.1 免疫抑制剂FK506(他克莫司) | 第17-23页 |
| 1.1.1 FK506的理化性质 | 第17页 |
| 1.1.2 FK506的生物学活性 | 第17-18页 |
| 1.1.3 FK506的生物合成过程 | 第18页 |
| 1.1.4 FK506的作用机制 | 第18-20页 |
| 1.1.5 FK506生物合成研究进展 | 第20-23页 |
| 1.2 海洋放线菌新资源挖掘 | 第23-31页 |
| 1.2.1 海洋放线菌菌株多样性研究 | 第26-28页 |
| 1.2.2 放线菌多相分类鉴定 | 第28-29页 |
| 1.2.3 海洋放线菌活性次级代谢产物 | 第29页 |
| 1.2.4 放线菌次级代谢产物合成基因的挖掘 | 第29-31页 |
| 1.3 放线菌次级代谢产物的生物合成及调控 | 第31-41页 |
| 1.3.1 异源表达在微生物药物生产中的应用 | 第32页 |
| 1.3.2 异源表达次级代谢产物的生物合成 | 第32-34页 |
| 1.3.3 放线菌次级代谢的转录调控 | 第34-41页 |
| 1.4 本文研究目的及意义 | 第41-43页 |
| 2 FK506异源表达新菌株的构建 | 第43-68页 |
| 2.1 引言 | 第43页 |
| 2.2 材料与方法 | 第43-55页 |
| 2.2.1 基因组文库构建实验菌株及载体以及实验使用宿主菌株信息 | 第43页 |
| 2.2.2 基因组文库的构建 | 第43-44页 |
| 2.2.3 基因组文库的筛选 | 第44-46页 |
| 2.2.4 BAC表达载体的构建与接合转移实验 | 第46-52页 |
| 2.2.5 发酵与萃取实验 | 第52-53页 |
| 2.2.6 HPLC检测实验 | 第53页 |
| 2.2.7 转化子总RNA的提取 | 第53页 |
| 2.2.8 反转录cDNA | 第53页 |
| 2.2.9 反转录PCR | 第53-55页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第55-67页 |
| 2.3.1 Streptomyces sp.KCCM 11116P基因组文库的构建 | 第55-57页 |
| 2.3.2 含有FK506全长基因簇质粒的转化子的筛选 | 第57-59页 |
| 2.3.3 筛选结果 | 第59-60页 |
| 2.3.4 表达质粒的改造 | 第60-62页 |
| 2.3.5 新菌株的构建及验证 | 第62-65页 |
| 2.3.6 新菌株的发酵实验 | 第65-67页 |
| 2.4 本章小结 | 第67-68页 |
| 3 放线菌基因组中调控因子的挖掘 | 第68-84页 |
| 3.1 引言 | 第68页 |
| 3.2 材料与方法 | 第68-71页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第68页 |
| 3.2.2 菌株L180的系统分类鉴定 | 第68-70页 |
| 3.2.3 菌株L180基因组中调节因子挖掘 | 第70-71页 |
| 3.2.4 菌株S187、KCCM11116P中潜在调节基因信息挖掘 | 第71页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第71-83页 |
| 3.3.1 菌株L180系统分类鉴定 | 第71-77页 |
| 3.3.2 菌株L180基因组中调节基因分析 | 第77-81页 |
| 3.3.3 菌株S187与菌株KCCM11116P基因组中调节基因分析 | 第81-83页 |
| 3.4 本章小结 | 第83-84页 |
| 4 调节蛋白过表达构建FK506生物合成新菌株 | 第84-109页 |
| 4.1 引言 | 第84页 |
| 4.2 材料与方法 | 第84-92页 |
| 4.2.1 实验菌株与载体 | 第84页 |
| 4.2.2 表达载体的构建 | 第84-86页 |
| 4.2.3 Streptomyces sp.KCCM11116P的原生质体制备 | 第86-87页 |
| 4.2.4 原生质体转化、再生与验证 | 第87-90页 |
| 4.2.5 前体添加实验 | 第90-91页 |
| 4.2.6 转化子总RNA提取 | 第91页 |
| 4.2.7 反转录cDNA | 第91页 |
| 4.2.8 实时定量PCR分析 | 第91-92页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第92-108页 |
| 4.3.1 SidR调节因子过表达构建FK506生物合成新菌株 | 第92-96页 |
| 4.3.2 StrR家族调节因子过表达构建FK506生物合成新菌株 | 第96-98页 |
| 4.3.3 SARP家族调节因子过表达构建FK506生物合成新菌株 | 第98-108页 |
| 4.4 本章小结 | 第108-109页 |
| 5 结论与展望 | 第109-111页 |
| 5.1 结论 | 第109页 |
| 5.2 创新点 | 第109-110页 |
| 5.3 展望 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-126页 |
| 附录A BAC载体改造使用的人工合成片段基因序列 | 第126-127页 |
| 附录B 调节蛋白基因序列 | 第127-131页 |
| 附录C 菌株16S rDNA基因序列 | 第131-132页 |
| 附录D 质粒图谱 | 第132-135页 |
| 作者简介 | 第135页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第135-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
