| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 真核生物内含子的剪接机制 | 第11-12页 |
| 1.2 参与剪接的顺式作用元件和反式作用因子 | 第12-14页 |
| 1.3 内含子剪接与基因表达 | 第14-15页 |
| 1.4 内含子剪接与mRNA质量监控 | 第15-17页 |
| 1.5 内含子剪接与核糖体生物合成 | 第17-18页 |
| 1.6 核糖蛋白的核糖体外功能 | 第18-19页 |
| 1.7 本课题研究的目标及意义 | 第19-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-33页 |
| 2.1.1 质粒 | 第20-22页 |
| 2.1.2 实验室前期构建的质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.3 菌种 | 第23-24页 |
| 2.1.4 引物序列 | 第24页 |
| 2.1.5 化学试剂及酶 | 第24-25页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第25页 |
| 2.1.7 培养基 | 第25-29页 |
| 2.1.8 试剂的配制 | 第29-33页 |
| 2.1.9 抗体和Co-IP相关柱子 | 第33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-55页 |
| 2.2.1 生物学软件分析 | 第33-34页 |
| 2.2.2 引物设计与PCR反应 | 第34-35页 |
| 2.2.3 DNA产物纯化回收 | 第35-36页 |
| 2.2.4 质粒DNA纯化回收 | 第36-37页 |
| 2.2.5 酶切体系(NEB) | 第37页 |
| 2.2.6 酶连体系(TaKaRa) | 第37页 |
| 2.2.7 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备和转化 | 第37-38页 |
| 2.2.8 大肠杆菌落PCR | 第38-39页 |
| 2.2.9 酵母电转化 | 第39-40页 |
| 2.2.10 酵母菌落PCR | 第40页 |
| 2.2.11 plasmid shuffling | 第40-42页 |
| 2.2.12 构建拟南芥RPL36基因内含子3’剪接位点点突变 | 第42页 |
| 2.2.13 Spotting assay | 第42-43页 |
| 2.2.14 热酚法提取酵母总RNA | 第43-44页 |
| 2.2.15 RNA变性电泳 | 第44页 |
| 2.2.16 RT-PCR | 第44-45页 |
| 2.2.17 Northern blot | 第45-47页 |
| 2.2.18 Western blot | 第47-50页 |
| 2.2.19 免疫共沉淀(Co-IP)及核糖体亲和纯化(RAP) | 第50-51页 |
| 2.2.20 polysome fractionation和protein isolation | 第51-52页 |
| 2.2.21 银染方案 | 第52-53页 |
| 2.2.22 β-半乳糖苷酶活性检测 | 第53-55页 |
| 第3章 结果与分析 | 第55-83页 |
| 3.1 本课题前期实验结果 | 第55-57页 |
| 3.2 报告基因检测含拟南芥RPL36B基因构建的酵母转化菌种中核糖体的功能 | 第57-60页 |
| 3.3 Western Blot检测不同拟南芥RPL36B构建在酵母细胞中RPL36B蛋白的表达量 | 第60-62页 |
| 3.4 Northern Blot检测不同拟南芥核糖蛋白RPL36B构建产生的mRNA在酵母细胞中的稳定性 | 第62-64页 |
| 3.5 核糖体功能补偿实验表明内含子不能剪接的拟南芥RPL36B构建表达的蛋白在功能上存在异常 | 第64-66页 |
| 3.6 检测不同拟南芥RPL36B构建表达的RPL36B蛋白可能存在的翻译后修饰情况 | 第66-74页 |
| 3.6.1 生物信息学软件在线预测拟南芥RPL36B蛋白可能的翻译后修饰情况 | 第68-69页 |
| 3.6.2 质谱检测拟南芥RPL36B蛋白可能的翻译后修饰情况 | 第69-73页 |
| 3.6.3 Western Blot检测拟南芥RPL36B蛋白可能的翻译后修饰情况 | 第73-74页 |
| 3.7 polysome fraction analysis检测不同拟南芥RPL36B构建表达的RPL36B蛋白在酵母细胞中的分布 | 第74-78页 |
| 3.8 基因芯片数据分析 | 第78-83页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-95页 |
| 附录 | 第95-96页 |
