| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第8-9页 |
| 材料与方法 | 第9-22页 |
| 1 仪器、试剂和耗材 | 第9-12页 |
| 1.1 主要仪器 | 第9-10页 |
| 1.2 主要试剂和耗材 | 第10-11页 |
| 1.3 常用试剂配制 | 第11-12页 |
| 2 C666-1 细胞培养的方法 | 第12页 |
| 3 建立LMP1表达沉默细胞系 | 第12-17页 |
| 3.1 CRISPR/Cas9双载体慢病毒转染C666-1 细胞及实验分组 | 第12-13页 |
| 3.2 单克隆细胞株的建立和保存 | 第13-14页 |
| 3.3 CRISPR/Cas9双载体慢病毒转染C666-1 细胞中总蛋白的提取 | 第14页 |
| 3.4 Western blotting检测重组细胞株LMP1蛋白水平 | 第14-17页 |
| 4 CCK8试剂盒检测细胞增殖能力 | 第17页 |
| 5 Transwell小室检测细胞侵袭转移能力 | 第17页 |
| 6 H19启动子甲基化检测 | 第17-19页 |
| 6.1 细胞系DNA的提取 | 第17-18页 |
| 6.2 DNA样本的焦亚硫酸盐修饰 | 第18页 |
| 6.3 亚硫酸氢盐基因组测序(BGS) | 第18-19页 |
| 7 H19 mRNA检测 | 第19-21页 |
| 7.1 细胞系RNA提取 | 第19页 |
| 7.2 RNA样本中残留DNA的灭活及cDNA合成 | 第19-20页 |
| 7.3 实时荧光定量PCR检测 | 第20-21页 |
| 8 统计学分析 | 第21-22页 |
| 结果 | 第22-30页 |
| 1 CRISPR/Cas9双载体慢病毒转染C666-1 细胞后绿色荧光的观察 | 第22页 |
| 2 单克隆细胞株建立后绿色荧光的观察 | 第22-23页 |
| 3 CRISPR/Cas9双载体慢病毒转染后细胞中LMP1的表达 | 第23-24页 |
| 4 LMP1基因沉默对C666-1 细胞增殖能力的影响 | 第24-25页 |
| 5 LMP1基因沉默对C666-1 细胞侵袭转移能力的影响 | 第25-26页 |
| 6 LMP1沉默前后C666-1 细胞系中H19启动子甲基化分析 | 第26-28页 |
| 7 LMP1沉默前后C666-1 细胞系中lncRNA H19 mRNA水平 | 第28-30页 |
| 讨论 | 第30-34页 |
| 1 慢病毒载体的选择 | 第30-31页 |
| 2 目的基因的选择 | 第31-33页 |
| 3 EBV潜伏膜蛋白 1(LMP1)与lncRNA H19 | 第33-34页 |
| 结论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-39页 |
| 综述 | 第39-53页 |
| 综述的参考文献 | 第45-53页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
