| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 植物体内RFOs的合成 | 第13-16页 |
| 1.1.1 肌醇半乳糖苷合成酶（GolS） | 第14-16页 |
| 1.1.2 棉子糖合成酶（RS） | 第16页 |
| 1.2 RFOs与非生物胁迫 | 第16-17页 |
| 1.3 RFOs与种子脱水耐受性 | 第17-18页 |
| 1.4 GolS基因的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.5 RS基因的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.3 菌株、载体、试剂和仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 PmGolS和PmRS基因的克隆与序列分析 | 第24-25页 |
| 2.2.1 PCR反应 | 第24页 |
| 2.2.2 PmGolS和PmRS基因的筛选、克隆 | 第24-25页 |
| 2.2.3 PmGolS和PmRS基因的序列分析 | 第25页 |
| 2.3 昼夜和非生物胁迫下PmGolS和PmRS基因的表达模式分析 | 第25-26页 |
| 2.3.1 ‘雪梅’两年生枝条处理 | 第25页 |
| 2.3.2 RNA提取及反转录 | 第25-26页 |
| 2.3.3 实时荧光定量（qRT-PCR） | 第26页 |
| 2.4 亚细胞定位分析 | 第26-28页 |
| 2.4.1 YFP融合表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.4.2 烟草注射 | 第27-28页 |
| 2.5 超量表达载体的构建 | 第28页 |
| 2.6 拟南芥遗传转化 | 第28-29页 |
| 2.6.1 拟南芥种子消毒 | 第28-29页 |
| 2.6.2 转基因拟南芥阳性苗筛选 | 第29页 |
| 2.6.3 T1代阳性苗表达量检测 | 第29页 |
| 2.7 拟南芥转化植株非生物逆境胁迫分析 | 第29-31页 |
| 2.7.1 拟南芥低温处理 | 第29-30页 |
| 2.7.2 电导率的测定 | 第30页 |
| 2.7.3 甘露醇胁迫下种子萌发率测定 | 第30-31页 |
| 2.8 梅花成熟胚子叶的遗传转化 | 第31-32页 |
| 2.8.1 预培养 | 第31页 |
| 2.8.2 侵染和共培养 | 第31页 |
| 2.8.3 选择培养及抗性芽的伸长 | 第31页 |
| 2.8.4 抗性芽的继代和生根 | 第31页 |
| 2.8.5 抗性芽PCR检测 | 第31-32页 |
| 2.9 数据处理 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-48页 |
| 3.1 PmGolS和PmRS基因的克隆和序列分析 | 第33-36页 |
| 3.1.1 系统进化树分析 | 第33-34页 |
| 3.1.2 同源蛋白序列分析 | 第34-36页 |
| 3.2 YFP融合表达载体的构建和亚细胞定位分析 | 第36页 |
| 3.3 ‘雪梅’PmGolS和PmRS基因的表达分析 | 第36-42页 |
| 3.3.1 昼夜表达分析 | 第37-38页 |
| 3.3.2 低温胁迫下的表达分析 | 第38-39页 |
| 3.3.3 ABA胁迫下的表达分析 | 第39-40页 |
| 3.3.4 高盐胁迫下的表达分析 | 第40页 |
| 3.3.5 干旱胁迫下的表达分析 | 第40-42页 |
| 3.4 拟南芥的遗传转化 | 第42-43页 |
| 3.4.1 超量表达载体构建 | 第42页 |
| 3.4.2 转基因拟南芥植株的筛选及检测 | 第42页 |
| 3.4.3 转基因拟南芥T1代阳性苗表达量检测 | 第42-43页 |
| 3.5 拟南芥转化植株非生物逆境胁迫分析 | 第43-46页 |
| 3.5.1 超量表达PmGolS拟南芥抗寒性未能提高 | 第43-45页 |
| 3.5.2 超量表达PmRS拟南芥抗寒性提高 | 第45-46页 |
| 3.5.3 超量表达Pm003196拟南芥种子在甘露醇胁迫下的萌发率提高 | 第46页 |
| 3.6 梅花成熟胚子叶遗传转化 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-53页 |
| 4.1 PmGolS蛋白亚细胞定位分析 | 第48页 |
| 4.2 ‘雪梅’PmGol S基因和PmRS基因的表达模式 | 第48-51页 |
| 4.2.1 昼夜表达模式 | 第48-49页 |
| 4.2.2 非生物逆境胁迫下的表达模式 | 第49-51页 |
| 4.3 超量表达PmGolS拟南芥的抗寒性 | 第51页 |
| 4.4 超量表达PmRS拟南芥的抗寒性 | 第51-52页 |
| 4.5 问题与展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 附录 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
