| 英文缩略词 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 概述 | 第11-12页 |
| 1.2 SOD的分类 | 第12页 |
| 1.3 Cu,Zn-SOD结构 | 第12-13页 |
| 1.4 SOD的催化作用机制 | 第13-14页 |
| 1.5 SOD的基因工程研究及分子改造进展 | 第14-15页 |
| 1.6 Cu,Zn-SOD突变与疾病 | 第15-16页 |
| 1.7 SOD的应用 | 第16-17页 |
| 1.7.1 SOD在临床上的应用 | 第16-17页 |
| 1.7.2 SOD在工业上的应用 | 第17页 |
| 1.7.3 SOD在农业上的应用 | 第17页 |
| 1.8 生物信息学辅助蛋白质分子的理性设计 | 第17-21页 |
| 1.8.1 PDB数据库 | 第17-18页 |
| 1.8.2 虚拟氨基酸突变提高蛋白质热稳定性 | 第18页 |
| 1.8.3 突变前后蛋白质折叠自由能的计算 | 第18-19页 |
| 1.8.4 分子动力学模拟(MD) | 第19-21页 |
| 1.9 本课题技术路线及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 Cu,Zn-SOD突变体的理性设计 | 第23-31页 |
| 2.1 模型与方法 | 第23-25页 |
| 2.1.1 计算平台 | 第23页 |
| 2.1.2 热稳定性氨基酸突变预测 | 第23-24页 |
| 2.1.3 氨基酸虚拟突变 | 第24-25页 |
| 2.1.4 分子动力学模拟(MD) | 第25页 |
| 2.2 结果与分析 | 第25-30页 |
| 2.2.1 小鼠Cu,Zn-SOD非保守氨基酸序列的确定 | 第25-26页 |
| 2.2.2 突变位点的热稳定性预测 | 第26-27页 |
| 2.2.3 分子动力学结果分析 | 第27-30页 |
| 本章小结 | 第30-31页 |
| 第三章 Cu,Zn-SOD和MCu,Zn-SOD基因克隆、表达及蛋白稳定性测定 | 第31-57页 |
| 3.1 实验材料及方法 | 第31-44页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第31页 |
| 3.1.2 菌株及载体 | 第31-32页 |
| 3.1.3 培养基及相关试剂配置 | 第32-34页 |
| 3.1.4 主要试剂及用品 | 第34页 |
| 3.1.5 仪器与设备 | 第34页 |
| 3.1.6 小鼠血液RNA的提取 | 第34-35页 |
| 3.1.7 RNA的反转录 | 第35页 |
| 3.1.8 设计扩增引物 | 第35页 |
| 3.1.9 PCR反应体系 | 第35-36页 |
| 3.1.10 突变基因的获取 | 第36-38页 |
| 3.1.11 扩增基因的检测方法 | 第38页 |
| 3.1.12 基因产物的回收 | 第38页 |
| 3.1.13 感受态细胞的制备（氯化钙法） | 第38-39页 |
| 3.1.14 双酶切 | 第39页 |
| 3.1.15 目的基因与载体的连接 | 第39-40页 |
| 3.1.16 转化 | 第40页 |
| 3.1.17 菌液PCR | 第40页 |
| 3.1.18 提取质粒 | 第40页 |
| 3.1.19 重组质粒检测 | 第40页 |
| 3.1.20 超氧化物歧化酶基因的测序 | 第40-41页 |
| 3.1.21 突变型质粒的构建 | 第41页 |
| 3.1.22 重组质粒转化表达菌BL21(DE3)感受态 | 第41页 |
| 3.1.23 导入重组质粒的BL21的检测 | 第41页 |
| 3.1.24 BL21转化菌的诱导表达及蛋白可溶性检测 | 第41页 |
| 3.1.25 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第41-42页 |
| 3.1.26 亲和层析纯化可溶性表达的蛋白 | 第42-43页 |
| 3.1.27 蛋白质浓度的测定（Lowry法） | 第43页 |
| 3.1.28 蛋白质透析 | 第43页 |
| 3.1.29 Cu,Zn-SOD酶活力测定 | 第43-44页 |
| 3.1.30 Cu,Zn-SOD热稳定性的测定 | 第44页 |
| 3.2 结果与分析 | 第44-55页 |
| 3.2.1 野生型Cu,Zn-SOD基因的获取 | 第44-45页 |
| 3.2.2 野生型重组质粒(pGEX6p1WT-SOD)的检测 | 第45-46页 |
| 3.2.3 pGEX6p1WT-SOD重组质粒的双酶切检测 | 第46页 |
| 3.2.4 Cu,Zn-SOD基因的测序结果 | 第46-47页 |
| 3.2.5 突变基因重组质粒的构建 | 第47-51页 |
| 3.2.6 重组质粒的诱导表达及表达产物的鉴定 | 第51-53页 |
| 3.2.7 蛋白质浓度测定 | 第53-54页 |
| 3.2.8 酶活力测定 | 第54-55页 |
| 3.2.9 热稳定性的比较 | 第55页 |
| 本章小结 | 第55-57页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第57-59页 |
| 4.1 Cu,Zn-SOD突变位点的选择 | 第57页 |
| 4.2 分子动力学模拟时间长短 | 第57页 |
| 4.3 基因突变与疾病 | 第57-58页 |
| 4.4 酶活测定的温度选择 | 第58页 |
| 4.5 Cu,Zn-SOD稳定性 | 第58页 |
| 4.6 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 在校期间研究成果及发表论文 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
