| 英文缩略语 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-13页 |
| 英文摘要 | 第13-17页 |
| 前言 | 第18-30页 |
| 第一部分 重组人长效白介素-7(IL-7)在CHO细胞的表达 | 第30-62页 |
| 1. 材料 | 第30-34页 |
| 1.1 基因、载体、菌株和细胞株 | 第30-31页 |
| 1.2 序列优化、引物合成和序列测定 | 第31页 |
| 1.3 试剂及试剂盒 | 第31页 |
| 1.4 常用溶液 | 第31-34页 |
| 2. 方法 | 第34-45页 |
| 2.1 序列优化 | 第34-37页 |
| 2.2 pcDNA5-IL-7-CTP表达系统建立 | 第37-40页 |
| 2.3 pIRES表达质粒构建 | 第40-42页 |
| 2.4 pCI-dhfr-IL-7-IRES-CD20表达系统构建 | 第42-45页 |
| 3. 结果 | 第45-57页 |
| 3.1 序列优化结果 | 第45-50页 |
| 3.2 表达载体构建及基因鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3 未优化的序列的表达情况评价 | 第51-52页 |
| 3.4 优化序列的瞬时转染细胞间接免疫荧光检测 | 第52-53页 |
| 3.5 稳定转染细胞间接免疫荧光鉴定 | 第53页 |
| 3.6 流式细胞仪分选高表达细胞株 | 第53-54页 |
| 3.7 ELISA鉴定细胞株IL-7表达量 | 第54-56页 |
| 3.8 IL-7-CTP阳性细胞western blot检测 | 第56-57页 |
| 4. 讨论 | 第57-61页 |
| 5. 小结 | 第61-62页 |
| 第二部分 IL-7-CTP蛋白纯化工艺研究 | 第62-78页 |
| 1. 材料 | 第62-63页 |
| 1.1 细胞系 | 第62-63页 |
| 1.2 纯化柱 | 第63页 |
| 1.3 常用试剂 | 第63页 |
| 2. 方法 | 第63-66页 |
| 2.1 使用生物学软件对蛋白质特征进行分析 | 第63页 |
| 2.2 蛋白纯化 | 第63-66页 |
| 2.2.1 初纯 | 第63-64页 |
| 2.2.2 常见的纯化方法 | 第64-65页 |
| 2.2.3 CNBr-CTP亲和纯化 | 第65-66页 |
| 2.2.4 纯化的蛋白使用ELISA测定IL-7-CTP纯度 | 第66页 |
| 3. 结果 | 第66-75页 |
| 3.1 IL-7-CTP蛋白进行生物信息学分析和预测 | 第66-69页 |
| 3.1.1 蛋白质的二级结构分 | 第66页 |
| 3.1.2 IL-7-CTP蛋白3D结构 | 第66-67页 |
| 3.1.3 预测IL-7-CTP蛋白的等电点和理论分子量 | 第67页 |
| 3.1.4 IL-7-CTP蛋白O糖基化位点的预测 | 第67页 |
| 3.1.5 IL-7-CTP蛋白N糖基化位点 | 第67-69页 |
| 3.1.6 IL-7-CTP蛋白二硫键 | 第69页 |
| 3.1.7 IL-7-CTP蛋白的疏水和亲水性预测 | 第69页 |
| 3.2. 硫酸铵沉淀预实验和优化 | 第69-70页 |
| 3.3. 常用的纯化方法 | 第70-73页 |
| 3.3.1 con A sepharose 4B纯化 | 第70-71页 |
| 3.3.2 Blue Sepharose 6 Fast Flow纯化IL-7-CTP | 第71页 |
| 3.3.3 离子交换纯化IL-7-CTP | 第71-72页 |
| 3.3.4 疏水层析纯IL-7-CTP | 第72-73页 |
| 3.4 CNBr-CTP亲和纯化IL-7-CTP | 第73-74页 |
| 3.5 各种非亲和纯化方法纯化结果分析 | 第74-75页 |
| 3.6 亲和纯化结果 | 第75页 |
| 4. 讨论 | 第75-77页 |
| 5. 小结 | 第77-78页 |
| 第三部分 IL-7-CTP活性研究 | 第78-91页 |
| 1. 材料 | 第79页 |
| 1.1 细胞株 | 第79页 |
| 1.2 试剂 | 第79页 |
| 1.3 主要仪器 | 第79页 |
| 2. 方法 | 第79-82页 |
| 2.1 L-7-CTP蛋白的半衰期检测 | 第79页 |
| 2.2 比活性测定 | 第79-80页 |
| 2.3 人外周血PBMC细胞分离 | 第80页 |
| 2.4 PBMC染色 | 第80-81页 |
| 2.5 不同浓度药物作用PBMC增殖 | 第81页 |
| 2.6 对健康人PBMC、T细胞和B细胞的促增殖作用 | 第81-82页 |
| 3. 结果 | 第82-88页 |
| 3.1 IL-7-CTP半衰期测定 | 第82-83页 |
| 3.2 IL-7-CTP比活性的测定 | 第83-84页 |
| 3.3 IL-7-CTP刺激PBMC增殖作用 | 第84-85页 |
| 3.4 PHA-P活化后,IL-7刺激健康人PBMC增殖作用 | 第85-86页 |
| 3.5 PHA-P刺激后,IL-7刺激IVA感染者PBMC增殖作用 | 第86-87页 |
| 3.6 不同时间段MTT检测IL-7对T细胞和PBMC细胞的促增殖作用 | 第87-88页 |
| 4. 讨论 | 第88-90页 |
| 5. 小结 | 第90-91页 |
| 全文总结 | 第91-92页 |
| 创新性 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-97页 |
| 综述 | 第97-105页 |
| 参考文献 | 第103-105页 |
| 博士期间发表的文章 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
