| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 人细小病毒B19 | 第12-16页 |
| 1.1.1 人细小病毒B19的发现及历史 | 第12页 |
| 1.1.2 人细小病毒B19的分类学、形态学及基因组学研究 | 第12-14页 |
| 1.1.3 人细小病毒B19的病原学及病理学研究 | 第14-15页 |
| 1.1.4 人细小病毒B19的临床表征 | 第15-16页 |
| 1.1.5 人细小病毒B19的诊断及治疗 | 第16页 |
| 1.2 细胞内蛋白质的核质穿梭机制研究 | 第16-20页 |
| 1.2.1 蛋白质的入核转运 | 第18-19页 |
| 1.2.2 蛋白质的出核转运 | 第19-20页 |
| 1.3 人细小病毒B19非结构蛋白NS1的核质穿梭机制研究 | 第20-22页 |
| 1.3.1 人细小病毒B19非结构蛋白NS1的结构及基本性质 | 第20-21页 |
| 1.3.2 细小病毒非结构蛋白的核质穿梭机制研究 | 第21页 |
| 1.3.3 人细小病毒B19 NS1的核质穿梭机制研究 | 第21-22页 |
| 1.4 哺乳动物双杂交系统 | 第22-24页 |
| 1.4.1 哺乳动物双杂交系统简介 | 第22-24页 |
| 1.4.2 哺乳动物双杂交系统在本实验中的具体应用 | 第24页 |
| 1.5 本研究目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第26-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 菌株及其培养基 | 第26页 |
| 2.1.2 质粒及其提取试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 细胞系及其培养基 | 第27页 |
| 2.1.4 其他 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第29-30页 |
| 2.2.2 重组载体的构建 | 第30-32页 |
| 2.2.3 高纯质粒的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.4 细胞培养及质粒转染 | 第33页 |
| 2.2.5 LMB处理 | 第33-34页 |
| 2.2.6 制片及共聚焦显微镜观察 | 第34页 |
| 2.2.7 哺乳动物双杂交系统的具体实验方案 | 第34-35页 |
| 第三章 实验结果及分析 | 第35-49页 |
| 3.1 NS1的亚细胞定位 | 第35-37页 |
| 3.1.1 免疫荧光检测NS1的细胞内定位 | 第35页 |
| 3.1.2 NS1-EGFP融合蛋白的细胞内定位 | 第35-36页 |
| 3.1.3 NS1与其他细胞器的共定位研究 | 第36-37页 |
| 3.2 NS1的核输出过程依赖于CRM1 | 第37-39页 |
| 3.2.1 免疫荧光检测NS1的定位改变 | 第37-38页 |
| 3.2.2 NS1-EGFP融合蛋白的定位改变 | 第38-39页 |
| 3.3 NS1核输出信号(NES)的初步确定 | 第39-43页 |
| 3.3.1 不含NLS/NES的NS1截短突变蛋白的定位 | 第39-40页 |
| 3.3.2 含三个NES的NS1截短突变蛋白的定位 | 第40页 |
| 3.3.3 含两个NES的NS1截短突变蛋白的定位 | 第40-41页 |
| 3.3.4 含一个NES的NS1截短突变蛋白的定位 | 第41-42页 |
| 3.3.5 NES介导EGFP的出核转运 | 第42-43页 |
| 3.4 依赖于CRM1的核输出信号(NES)的确定 | 第43-44页 |
| 3.4.1 NS1截短突变蛋白的定位改变 | 第43-44页 |
| 3.4.2 NS1-NES-EGFP融合蛋白的定位改变 | 第44页 |
| 3.5 NES关键氨基酸位点的确定 | 第44-47页 |
| 3.5.1 NS1-NES关键氨基酸位点的突变 | 第44-46页 |
| 3.5.2 NS1全长上NES关键氨基酸位点的突变 | 第46-47页 |
| 3.6 哺乳动物双杂交系统检测NS1与CRM1的直接相互作用 | 第47-49页 |
| 第四章 讨论及展望 | 第49-52页 |
| 4.1 讨论 | 第49-50页 |
| 4.2 展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
