| 本研究的主要创新点 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第14-57页 |
| 1 枯草芽胞杆菌及其应用 | 第14-19页 |
| 2 枯草芽胞杆菌制剂的相关研究进展 | 第19-32页 |
| 2.1 枯草芽胞杆菌固体发酵 | 第19-20页 |
| 2.2 以收获菌体细胞为目的枯草芽胞杆菌液体发酵 | 第20-27页 |
| 2.3 以提高活芽胞数为目的枯草芽胞杆菌液体发酵 | 第27-30页 |
| 2.4 统计试验设计在优化枯草芽胞杆菌发酵培养基和培养条件中的应用 | 第30-31页 |
| 2.5 枯草芽胞杆菌制剂生产方面尚待改进的方面 | 第31-32页 |
| 3 枯草芽胞杆菌细胞自溶的研究进展 | 第32-54页 |
| 3.1 枯草芽胞杆菌的细胞自溶现象 | 第32-38页 |
| 3.3 枯草芽胞杆菌自溶现象的遗传分析 | 第38-44页 |
| 3.4 枯草芽胞几个重要自溶酶与其调控因子的研究进展 | 第44-51页 |
| 3.5 高温培养对枯草芽胞杆菌的危害及控制该菌细胞自溶的策略 | 第51-54页 |
| 4 研究目的和意义 | 第54-57页 |
| 4.1 提高枯草芽胞杆菌工业菌株WHK-Z12的芽胞产量 | 第54-55页 |
| 4.2 抑制枯草芽胞杆菌168的细胞白溶 | 第55-57页 |
| 第二章 响应面方法优化培养基以提高枯草芽胞杆菌WHK-Z12的芽胞产量 | 第57-82页 |
| 1 试验材料 | 第57-59页 |
| 1.1 菌株 | 第57页 |
| 1.2 培养基成分和试剂 | 第57-59页 |
| 1.3 培养基 | 第59页 |
| 1.4 主要试验仪器设备 | 第59页 |
| 2 实验方法 | 第59-67页 |
| 2.1 接种物的制备 | 第59-60页 |
| 2.2 摇瓶培养 | 第60页 |
| 2.3 生物反应器发酵 | 第60页 |
| 2.4 测定芽胞产量 | 第60页 |
| 2.5 分析培养基的氨基酸组成 | 第60-61页 |
| 2.6 试验设计 | 第61-67页 |
| 3 试验结果与分析 | 第67-79页 |
| 3.1 不同碳源和氮源对芽胞产量的影响 | 第67-69页 |
| 3.2 使用Plackett-Burman筛选关键的培养基成分 | 第69-71页 |
| 3.3 采用最陡坡试验寻找可操作的优化区域 | 第71-72页 |
| 3.4 响应面模拟和优化枯草芽胞杆菌WHK-Z12的芽胞产量 | 第72-76页 |
| 3.5 小规模分批发酵验证预测模型 | 第76-78页 |
| 3.6 小结 | 第78-79页 |
| 4 讨论 | 第79-82页 |
| 第三章 敲除自溶酶相关基因来抑制枯草芽胞杆菌168的细胞自溶 | 第82-136页 |
| 1 实验材料 | 第82-87页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第82-84页 |
| 1.2 药品与试剂 | 第84-85页 |
| 1.3 培养基与溶液 | 第85-86页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第86-87页 |
| 2 实验方法 | 第87-98页 |
| 2.1 枯草芽胞杆菌基因组与质粒DNA、大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第87页 |
| 2.2 引物设计 | 第87-89页 |
| 2.3 聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因 | 第89-90页 |
| 2.4 限制性内切酶反应 | 第90页 |
| 2.5 DNA琼脂糖电泳与电泳产物的回收纯化 | 第90页 |
| 2.6 连接反应 | 第90页 |
| 2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备、质粒DNA的转化及转化子鉴定 | 第90-91页 |
| 2.8 枯草芽胞杆菌感受态细胞的制备、质粒DNA的转化及转化子的鉴定 | 第91-92页 |
| 2.9 DNA序列测定与序列比对 | 第92页 |
| 2.10 敲除载体的构建 | 第92-95页 |
| 2.11 同源重组法敲除目的基因 | 第95-96页 |
| 2.12 基因敲除流程 | 第96-97页 |
| 2.13 观察枯草芽胞杆菌菌体生长速度 | 第97页 |
| 2.14 测定枯草芽胞杆菌的生长曲线 | 第97-98页 |
| 2.15 枯草芽胞杆菌活菌数和芽胞数的测定 | 第98页 |
| 3 结果与分析 | 第98-131页 |
| 3.1 基因敲除载体的构建 | 第98-105页 |
| 3.2 枯草芽胞杆菌自溶酶相关基因缺失突变株的构建和鉴定 | 第105-115页 |
| 3.3 培养温度对枯草芽胞杆菌细胞自溶的影响 | 第115-116页 |
| 3.4 自溶酶基因的单突变对枯草芽胞杆菌细胞自溶的影响 | 第116-121页 |
| 3.5 自溶酶基因的双重缺失对枯草芽胞杆菌细胞自溶的影响 | 第121-124页 |
| 3.6 自溶酶基因的多重缺失对细胞自溶的影响 | 第124-130页 |
| 3.7 小结 | 第130-131页 |
| 4 讨论 | 第131-136页 |
| 4.1 枯草芽胞杆菌的原噬菌体有功能吗? | 第131-133页 |
| 4.2 抑制枯草芽胞杆菌细胞自溶的最佳策略 | 第133-134页 |
| 4.3 枯草芽胞杆菌中各个与自溶有关的基因在功能上是如何互补的? | 第134-136页 |
| 本研究总结 | 第136-139页 |
| 参考文献 | 第139-161页 |
| 博士研究生期间所发表论文 | 第161-162页 |
| 致谢 | 第162-164页 |
| 作者简历 | 第164页 |
