| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩写词表（Abbreviation） | 第6-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| 1.1 鸟类性别鉴定的意义 | 第11-12页 |
| 1.2 鸟类性别鉴定的现状 | 第12页 |
| 1.3 鸟类性别鉴定的方法 | 第12-15页 |
| 1.3.1 生物计量性别鉴定 | 第13页 |
| 1.3.2 生殖器检查 | 第13-14页 |
| 1.3.3 分子性别鉴定 | 第14-15页 |
| 1.4 鸟类CHD基因性别鉴定的机制 | 第15-16页 |
| 2 实验材料与方法 | 第16-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第16页 |
| 2.2 实验主要试剂 | 第16页 |
| 2.3 实验设备 | 第16-17页 |
| 2.4 实验方法 | 第17-29页 |
| 2.4.1 样本的采集 | 第17-18页 |
| 2.4.2 样本基因组DNA提取 | 第18-19页 |
| 2.4.2.1 鹈鹕样品的处理 | 第18页 |
| 2.4.2.2 样品的消化 | 第18-19页 |
| 2.4.2.3 DNA的提取 | 第19页 |
| 2.4.3 通用引物PCR扩增 | 第19-21页 |
| 2.4.4 琼脂糖凝胶的制备 | 第21页 |
| 2.4.5 凝胶DNA回收 | 第21-22页 |
| 2.4.6 pMD18-T载体连接、转化 | 第22-23页 |
| 2.4.6.1 pMD18-T载体连接 | 第22-23页 |
| 2.4.6.2 pMD18-T载体转化 | 第23页 |
| 2.4.7 抽提质粒 | 第23-24页 |
| 2.4.8 双酶切检测 | 第24页 |
| 2.4.9 测序 | 第24-25页 |
| 2.4.10 引物设计 | 第25-27页 |
| 2.4.10.1 引物组合的设计 | 第25-26页 |
| 2.4.10.2 单对特异性引物设计 | 第26-27页 |
| 2.4.11 优化PCR反应条件 | 第27-28页 |
| 2.4.12 引物检验 | 第28页 |
| 2.4.12.1 已知的鹈鹕性别检测 | 第28页 |
| 2.4.12.2 未知性别鹈鹕样本的检验 | 第28页 |
| 2.4.13 鹈鹕与其他鸟类物种的聚类分析 | 第28-29页 |
| 2.5 计算试验引物的正确率 | 第29页 |
| 3 实验结果 | 第29-45页 |
| 3.1 鹈鹕基因组DNA提取 | 第29页 |
| 3.2 CHD基因通用引物扩增结果 | 第29-33页 |
| 3.2.1 P2/P8引物对扩增结果 | 第30页 |
| 3.2.2 2550F/2718R引物对扩增结果 | 第30-31页 |
| 3.2.3 PCR扩增系统进行优化 | 第31-33页 |
| 3.2.3.1 不同DNA模板扩增模板结果 | 第31-32页 |
| 3.2.3.2 通用引物PCR扩增反应体系的退火温度梯度 | 第32-33页 |
| 3.3 pMD18-T载体连接与菌液鉴定 | 第33-34页 |
| 3.4 双酶切检测 | 第34-35页 |
| 3.5 测序结果与分析处理 | 第35-36页 |
| 3.5.1 CHD-W测序结果分析 | 第35页 |
| 3.5.2 CHD-Z测序结果分析 | 第35-36页 |
| 3.6 特异性引物的PCR优化结果 | 第36-42页 |
| 3.6.1 引物特异性验证 | 第36-38页 |
| 3.6.2 复合引物对未知性别样本检测结果 | 第38-40页 |
| 3.6.2.1 复合引物Z2/W3对未知性别样本检测结果 | 第38-39页 |
| 3.6.2.2 复合引物Z3/W3对未知性别样本检测结果 | 第39-40页 |
| 3.6.3 特异引物对未知性别样本检测结果 | 第40-42页 |
| 3.6.3.1 特异引物T2对未知性别样本检测结果 | 第40-41页 |
| 3.6.3.2 特异引物T3对未知性别样本检测结果 | 第41-42页 |
| 3.7 试验引物准确率检测 | 第42-43页 |
| 3.8 不同物种间基于CHD-Z、CHD-W基因片段的系统进化关系 | 第43-45页 |
| 3.8.1 鹈鹕CHD-Z片段与其他物种的CHD-Z片段聚类分析 | 第43-44页 |
| 3.8.2 鹈鹕CHD-W片段与其他物种的CHD-W片段聚类分析 | 第44-45页 |
| 4 分析与讨论 | 第45-49页 |
| 4.1 样本的采集 | 第45-46页 |
| 4.2 样本消化 | 第46页 |
| 4.3 通用引物的选择 | 第46-47页 |
| 4.4 鹈鹕基因序列设计的引物在性别鉴定中的效果 | 第47-48页 |
| 4.5 鹈鹕基因组DNA的保存 | 第48页 |
| 4.6 鹈鹕 CHD 基因的发育进化 | 第48-49页 |
| 5 全文结论 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录 | 第58-72页 |
