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多环芳烃菲对微生物生态毒理研究、菲降解菌的分离鉴定及降解基因克隆与表达

中文摘要第8-11页
第一章 前言第11-36页
    第一节 多环芳烃菲的微生物降解综述第11-29页
        1 多环芳烃的累积和环境毒性第11-13页
            1.1 PAHs的理化和毒性特征第12页
            1.2 菲的结构特性第12-13页
        2 菲的生物降解第13-25页
            2.1 细菌对菲的好氧降解途径第13-16页
            2.2 真菌对菲的降解途径第16页
            2.3 菲细菌降解途径中的酶系第16-20页
            2.4 菲降解的分子生物学研究第20-25页
            2.5 菲的厌氧降解第25页
        3 菲污染的生物修复第25-29页
            3.1 微生物的引入第26页
            3.2 生物可利用性(bioavailability)对菲降解速率的影响第26-28页
            3.3 营养盐的加入第28页
            3.4 共代谢降解第28-29页
    第二节 细菌谷胱甘肽S-转移酶结构功能及其在芳烃降解中的作用第29-36页
        1 GST的分类及蛋白结构第29-31页
            1.1 GST的分类第29-30页
            1.2 细菌GST的蛋白结构第30-31页
        2 细菌中GST的催化类型第31-32页
            2.1 二氯甲烷脱氯酶(DMCD)第31-32页
            2.2 PcpC和LinD第32页
            2.3 LigF第32页
            2.4 OrfE3和NagL第32页
        3 GST在异生物质降解中的作用第32-34页
        4 GST基因的进化路程第34-35页
        5 GST酶的应用潜力第35-36页
第二章 菲对水田微生态系统的急性效应第36-49页
    1 材料与方法第37-41页
    2 结果第41-47页
        2.1 菲对土壤好氧细菌数量动态变化影响第41页
        2.2 菲对土壤中真菌数量动态变化的影响第41-42页
        2.3 菲对土壤放线菌数量的动态影响第42-43页
        2.4 菲对土壤水解发酵性细菌数量的动态影响第43页
        2.5 菲对土壤厌氧固氮菌数量动态变化的影响第43-44页
        2.6 菲对土壤产甲烷细菌数量动态变化的影响第44页
        2.7 菲对土壤脱氢酶的动态影响第44-45页
        2.8 菲对土壤脲酶活性的动态影响第45-46页
        2.9 菲对稻田土壤微生物(真细菌)群落结构的DGGE分析第46-47页
    3 讨论第47-49页
        3.1 菲对土壤好氧微生物种群的影响第47-48页
        3.2 菲对土壤厌氧微生物种群的影响第48页
        3.3 菲对土壤酶活性的影响第48页
        3.4 菲对土壤微生物(真细菌)多样性的影响第48-49页
第三章 菲降解菌株分离、鉴定及系统发育研究第49-66页
    1 材料与方法第49-53页
    2 结果第53-64页
        2.1 分离菌株的降解能力第53-54页
        2.2 分离菌株的形态学研究第54-55页
        2.3 分离菌株的生理生化特性第55-56页
        2.4 分离菌株的抗生素敏感性第56-57页
        2.5 分离菌株的全细胞脂肪酸分析第57页
        2.6 G+C mol%含量分析第57页
        2.7 分离菌株碳源利用第57-58页
        2.8 分离菌株的16S rDNA序列分析第58页
        2.9 分离菌株的ITS序列分析第58-60页
        2.10 基于16S rDNA序列系统发育树的构建第60-62页
        2.11 基于分离菌株和同属细菌ITS序列的系统发育树第62-63页
        2.12 遗传距离矩阵建立第63-64页
    3 讨论第64-66页
第四章 菲降解菌株生长和降解特性研究第66-77页
    1 材料与方法第66-68页
    2 结果第68-76页
        2.1 菲降解菌株生长条件第68-71页
        2.2 降解菌株菲降解途径的初步探讨第71-72页
        2.3 菌株ZX4的菲降解特性第72-76页
    3 讨论第76-77页
第五章 菲降解菌芳香环羟化双加氧酶铁硫蛋白α亚基基因的克隆第77-89页
    1 材料与方法第78-82页
    2 结果第82-87页
        2.1 引物1扩增和测序结果第82-83页
        2.2 引物2在菌株EVA17中前扩增结果第83页
        2.3 阳性克隆子的筛选与鉴定第83-84页
        2.4 目的基因的序列测定与分析第84-87页
        2.5 系统发育构建第87页
    3 讨论第87-89页
第六章 菲降解菌间位裂解操纵子基因克隆第89-103页
    1 材料与方法第89-92页
    2 结果第92-101页
        2.1 基因克隆第92页
        2.2 核酸序列测定与分析第92-96页
        2.3 phnH基因编码氨基酸序列推导与分析第96-97页
        2.4 基于MCP水解酶基因序列系统发育树构建第97-98页
        2.5 phnI基因编码氨基酸序列推导与分析第98-100页
        2.6 基于邻苯二酚2,3-双加氧酶基因序列系统发育树构建第100-101页
    3 讨论第101-103页
第七章 邻苯二酚2,3-双加氧酶编码基因在大肠杆菌中的表达第103-110页
    1 材料与方法第103-106页
    2 结果第106-109页
        2.1 邻苯二酚2,3-双加氧酶编码基因的PCR扩增及表达载体的构建第106-107页
        2.2 重组表达载体的酶切鉴定结果第107-108页
        2.3 外源基因在大肠杆菌中的表达与酶活分析第108-109页
        2.4 重组菌株邻苯二酚2,3-双加氧酶活性的检测第109页
    3 讨论第109-110页
第八章 谷胱甘肽S-转移酶编码基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达第110-121页
    1 材料和方法第110-115页
    2 结果第115-119页
        2.1 GST编码基因的PCR扩增及序列测定第115-116页
        2.2 GST氨基酸序列同源性分析第116-117页
        2.3 表达载体的构建第117-118页
        2.4 GST基因在大肠杆菌中的诱导表达第118-119页
        2.5 Western Blotting test第119页
        2.6 重组菌株GST活性的检测第119页
    3 讨论第119-121页
第九章 GST编码基因克隆引物的应用第121-127页
    1 材料和方法第121-123页
    2 结果第123-126页
        2.1 降解菌株GST酶编码基因的PCR扩增第123-124页
        2.2 基于GST编码基因保守区的系统发育树构建第124页
        2.3 GST与C230共扩增及序列测定第124-125页
        2.4 GST编码基因的引物在污染土壤DNA中的扩增第125-126页
    3 讨论第126-127页
Abstract第127页
本文主要结论及展望第131-134页
参考文献第134-146页
博士研究生学习期间论文及获奖情况第146页

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