摘要 | 第5-6页 |
英文摘要 | 第6-9页 |
中英文缩略词对照表 | 第12-15页 |
第一部分 Rig-I对巨噬细胞的数量及凋亡的影响 | 第15-32页 |
1. 引言 | 第15-17页 |
2. 实验材料 | 第17-20页 |
2.1 主要生化与分子细胞生物学试剂 | 第17-18页 |
2.2 主要溶液配方 | 第18页 |
2.3 主要仪器设备 | 第18-19页 |
2.4 实验动物 | 第19页 |
2.5 PCR引物设计与合成 | 第19-20页 |
3. 实验方法 | 第20-25页 |
3.1 鼠尾DNA的提取 | 第20页 |
3.2 Rig-I基因敲除老鼠的鉴定 | 第20-21页 |
3.3 小鼠腹腔巨噬细胞的提取和培养 | 第21-22页 |
3.4 腹腔巨噬细胞的凋亡 | 第22页 |
3.5 腹腔巨噬细胞比例的检测 | 第22页 |
3.6 腹腔巨噬细胞的分群 | 第22-23页 |
3.7 RT-PCR检测凋亡相关基因的表达水平 | 第23-25页 |
3.8 统计分析 | 第25页 |
4. 实验结果 | 第25-29页 |
4.1 Rig-I基因增加腹腔巨噬细胞的比例 | 第25-26页 |
4.2 Rig-I基因抑制腹腔巨噬细胞的凋亡 | 第26-27页 |
4.3 Rig-I基因对腹腔巨细胞的分群发挥重要作用 | 第27-29页 |
5. 讨论 | 第29-31页 |
6. 本部分总结 | 第31-32页 |
第二部分 Rig-I对LPS诱导的巨噬细胞增殖,凋亡及功能的作用研究 | 第32-62页 |
1. 引言 | 第32-39页 |
2. 实验材料 | 第39-42页 |
2.1 材料 | 第39页 |
2.2 主要化学与分子生物学实验试剂 | 第39-40页 |
2.3 主要试剂配方 | 第40页 |
2.4 PCR引物设计与合成 | 第40-41页 |
2.5 实验仪器 | 第41-42页 |
3. 实验方法 | 第42-48页 |
3.1 细胞复苏,培养,冻存和计数 | 第42页 |
3.2 质粒提取,纯化和酶切鉴定 | 第42-44页 |
3.3 Rig-I基因沉默Raw264.7 细胞株构建 | 第44页 |
3.4 Rig-I高表达Raw264.7 细胞株构建 | 第44页 |
3.5 LPS处理Raw264.7 细胞株 | 第44-45页 |
3.6 细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK8 )检测细胞增殖 | 第45页 |
3.7 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第45页 |
3.8 qPCR检测细胞因子的表达量 | 第45-46页 |
3.9 细胞迁移实验 | 第46页 |
3.10 细胞粘附试验 | 第46-47页 |
3.11 Western Blot | 第47页 |
3.12 统计分析 | 第47-48页 |
4. 结果 | 第48-58页 |
4.1 Rig-I基因促进巨噬细胞的增殖 | 第48-49页 |
4.2 Rig-I基因抑制LPS诱导的巨噬细胞凋亡 | 第49-50页 |
4.3 Rig-I促进LPS诱导的巨噬细胞细胞因子的表达 | 第50-52页 |
4.4 Rig-I促进LPS诱导的巨噬细胞的迁移 | 第52-53页 |
4.5 Rig-I促进LPS诱导的巨噬细胞与细胞外基质的粘附作用 | 第53-55页 |
4.6 Rig-I促进LPS诱导的AKT磷酸化和下游NF-κB通路的激活 | 第55-58页 |
5. 讨论 | 第58-61页 |
6. 本部分结论 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-68页 |
致谢 | 第68-71页 |
攻读硕士期间发表的学术论文 | 第71页 |