| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第1章 绪论 | 第18-25页 |
| 1 血管重建 | 第18-21页 |
| 1.1 血管重建中的力学因素 | 第19-20页 |
| 1.2 血管重建中ECs和VSMCs的信息交流 | 第20-21页 |
| 2 细胞核结构与力学因素 | 第21-24页 |
| 2.1 细胞核的力学特性 | 第21-22页 |
| 2.2 核膜蛋白与细胞功能 | 第22-24页 |
| 3 本文的研究思路和内容 | 第24-25页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第25-33页 |
| 1 实验仪器和材料 | 第25-27页 |
| 1.1 实验仪器 | 第25页 |
| 1.2 实验试剂 | 第25页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第25页 |
| 1.4 引物序列和干扰片段序列 | 第25-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.1 RNA干扰实验 | 第27-28页 |
| 2.2 过表达质粒载体构建 | 第28-29页 |
| 2.3 过表达质粒核电转 | 第29-30页 |
| 2.4 BrdU原位检测细胞增殖 | 第30页 |
| 2.5 流式细胞术检测细胞周期 | 第30页 |
| 2.6 流式细胞术检测细胞早期凋亡 | 第30-31页 |
| 2.7 转录因子活性芯片检测 | 第31页 |
| 2.8 细胞电镜实验 | 第31-32页 |
| 2.9 统计学分析 | 第32-33页 |
| 第3章 实验结果 | 第33-64页 |
| 1 细胞鉴定结果 | 第33-34页 |
| 1.1 原代培养ECs的形态观察和鉴定 | 第33页 |
| 1.2 原代培养VSMCs的形态观察和鉴定 | 第33-34页 |
| 2 切应力条件下单独培养ECs核膜蛋白的表达及其增殖和凋亡 | 第34-37页 |
| 2.1 低切应力下调了单独培养ECs核膜蛋白的表达 | 第34-35页 |
| 2.2 低切应力上调单独培养ECs的增殖 | 第35-36页 |
| 2.3 低切应力促进单独培养ECs的凋亡 | 第36-37页 |
| 3 静态条件下VSMCs对ECs核膜蛋白的表达及其增殖和凋亡的影响 | 第37-40页 |
| 3.1 静态条件下VSMCs对ECs核膜蛋白的表达并无显著影响 | 第38页 |
| 3.2 静态条件下VSMCs上调ECs的增殖 | 第38页 |
| 3.3 静态条件下VSMCs上调ECs的凋亡 | 第38-40页 |
| 4 切应力和VSMCs的协同作用对ECs核膜蛋白的表达及其增殖和凋亡的影响 | 第40-42页 |
| 4.1 正常切应力条件下VSMCs对ECs核膜蛋白的表达并无显著影响 | 第40-41页 |
| 4.2 正常切应力条件下VSMCs对ECs的增殖并无显著影响 | 第41页 |
| 4.3 正常切应力条件下VSMCs对ECs的凋亡并无显著影响 | 第41-42页 |
| 5 核膜蛋白的表达对ECs增殖和凋亡的影响 | 第42-47页 |
| 5.1 静态条件下抑制核膜蛋白的表达上调ECs的增殖和凋亡 | 第42-44页 |
| 5.2 静态条件下Nesprin2和LaminA过表达对ECs增殖和凋亡的影响 | 第44-47页 |
| 6 核膜蛋白的过表达逆转了低切应力对ECs增殖和凋亡的影响 | 第47-49页 |
| 6.1 Nesprin2和LaminA的过表达显著抑制了低切应力诱导的ECs增殖 | 第47-48页 |
| 6.2 Nesprin2和LaminA的过表达显著抑制了低切应力诱导的ECs凋亡 | 第48-49页 |
| 7 改变Nesprin2和LaminA表达对ECs转录因子活性的影响 | 第49-53页 |
| 7.1 下调Nesprin2和LaminA的表达对ECs转录因子活性的影响 | 第49-51页 |
| 7.2 上调Nesprin2和LaminA的表达对ECs转录因子活性的影响 | 第51-53页 |
| 8 转录因子芯片结果的验证 | 第53-56页 |
| 8.1 静态条件下Nesprin2和LaminA表达下调对ECs转录因子活性的影响 | 第55-56页 |
| 8.2 切应力条件下ECs转录因子的活性变化 | 第56页 |
| 9 IPA软件预测靶基因 | 第56-59页 |
| 10 低切应力条件下Nesprin2和LaminA过表达对其下游转录因子和靶基因的影响 | 第59-62页 |
| 10.1 Nesprin2和LaminA过表达逆转了低切应力对其下游转录因子活性的影响 | 第59-62页 |
| 10.2 Nesprin2和LaminA的过表达对其转录因子靶基因的影响 | 第62页 |
| 11 Nesprin2和LaminA蛋白的缺乏影响细胞核膜结构 | 第62-64页 |
| 第4章 讨论 | 第64-72页 |
| 1 力学因素与ECs功能 | 第64-66页 |
| 2 低切应力抑制核膜蛋白的表达并诱导ECs功能异常 | 第66-67页 |
| 3 Nesprin2和LaminA通过调控特定的转录因子及其靶基因影响ECs细胞功能 | 第67-72页 |
| 全文小结 | 第72-73页 |
| 文献综述：核骨架蛋白的研究进展 | 第73-82页 |
| 1 引言 | 第73-74页 |
| 2 核骨架蛋白的研究历史 | 第74页 |
| 3 核骨架蛋白的分类及功能 | 第74-79页 |
| 3.1 Nesprin家族 | 第75-76页 |
| 3.2 SUN家族 | 第76-77页 |
| 3.3 Lamin蛋白 | 第77-78页 |
| 3.4 Emerin蛋白 | 第78-79页 |
| 4 核膜蛋白在细胞内力学传导以及疾病中的作用 | 第79-81页 |
| 4.1 细胞核膜蛋白在力学因素影响细胞功能中的作用 | 第79-80页 |
| 4.2 核膜蛋白与人类疾病 | 第80-81页 |
| 5 展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 附录1 实验仪器 | 第91-92页 |
| 附录2 试剂 | 第92-94页 |
| 附录3 主要溶液配制 | 第94-96页 |
| 附录4 实验方法 | 第96-102页 |
| 4.1 大鼠胸主动脉ECs和VSMCs的原代培养和鉴定 | 第96-97页 |
| 4.2 ECs和VSMCs联合培养的平行平板流动腔系统 | 第97-99页 |
| 4.3 细胞实验分组 | 第99-100页 |
| 4.4 蛋白免疫印迹实验 | 第100页 |
| 4.5 RNA提取和荧光定量PCR | 第100-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 攻读博士学位期间已发表的学术论文 | 第103-106页 |
