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水稻T-DNA插入突变体库构建与利用及miRNA基因功能研究

缩写名词表第8-9页
中文摘要第9-11页
Abstract第11-13页
1 文献综述第14-38页
    1.1 植物突变体库与功能基因组学第14-26页
        1.1.1 植物功能基因组学第14-15页
        1.1.2 植物功能基因组学的研究方法及技术第15-23页
            1.1.2.1 基于表达谱和高通量测序技术的基因功能研究第15-16页
            1.1.2.2 基于突变体库的基因功能研究第16-21页
            1.1.2.3 基于表达模式及表达量的基因功能研究第21-23页
        1.1.3 T-DNA插入位点侧翼序列分离方法第23-25页
        1.1.4 利用突变体库的两种研究策略第25页
        1.1.5 T-DNA插入突变体库大小计算第25-26页
    1.2 siRNA和miRNA第26-35页
        1.2.1 siRNA第26-30页
            1.2.1.1 siRNA的发现与加工过程第26-27页
            1.2.1.2 siRNA的放大效应机制第27-28页
            1.2.1.3 siRNA引起的转录后水平的基因沉默第28页
            1.2.1.4 转录水平的基因沉默第28页
            1.2.1.5 病毒诱导的基因沉默第28-29页
            1.2.1.6 cis-acting siRNA和trans-acting siRNA第29-30页
        1.2.2 miRNA第30-35页
            1.2.2.1 miRNA发现与加工过程第30-33页
            1.2.2.2 mi RNA-RISC对靶基因mRNA的抑制方式第33页
            1.2.2.3 miRNA分离克隆与表达量的检测方法第33页
            1.2.2.4 植物miRNA靶基因预测与鉴定第33-34页
            1.2.2.5 人工构建miRNAs(Artificial miRNAs,amiRNAs)第34页
            1.2.2.6 miRNA功能第34-35页
    1.3 miR156与水稻株型第35-38页
2 本研究的目的和意义第38-39页
3 材料方法第39-43页
    3.1 植物材料和生长条件第39页
    3.2 突变体基因型判定与共分离检测第39页
    3.3 mi RNA超表达载体构建第39-40页
    3.4 Stem–loop RT-PCR检测miRNA的表达量第40页
    3.5 RT-PCR和qRT-PCR第40-41页
    3.6 载体构建和遗传转化第41页
    3.7 GAL4–UAS双元反式激活系统第41-42页
    3.8 GUS与GFP表达检测第42-43页
4 结果与分析第43-87页
    4.1 大型水稻T-DNA插入突变体库的构建第43页
    4.2 突变体的种植、筛选与鉴定第43-61页
        4.2.1 CZH0773(03Z11BC50)家系第44-47页
            4.2.1.1 czh0773M突变体表型第44-45页
            4.2.1.2 共分离检测第45-46页
            4.2.1.3 czh0773M突变体互补试验第46-47页
        4.2.2 CZH1731(03Z11CE42)家系第47-48页
        4.2.3 CZH1588(03Z11CA28)家系第48-61页
            4.2.3.1 czh1588M突变体的获得第48-49页
            4.2.3.2 共分离检测第49-50页
            4.2.3.3 其它相关实验第50-54页
            4.2.3.4 互补实验出现转空载体恢复表型的现象第54-55页
            4.2.3.5 35S启动子的增强与沉默效应造成突变表型的出现与消失第55-58页
            4.2.3.6 35S启动子造成载体上的GUS报告基因异常表达第58-60页
            4.2.3.7 发生甲基化的细胞内并非所有 35S启动子位点都被甲基化第60-61页
            4.2.3.8 35S启动子甲基化测序第61页
    4.3 小型miRNA超表达突变体库的构建第61-62页
    4.4 部分miRNA超表达后的表型第62-87页
        4.4.1 osa-miR319 超表达植株第62页
        4.4.2 osa-miR529 超表达植株第62-64页
        4.4.3 osa-miR167 超表达植株第64-66页
        4.4.4 osa-miR160 超表达植株第66-68页
        4.4.5 osa-miR399 超表达植株第68-74页
            4.4.5.1 osa-miR399k-OX植株的获得第68页
            4.4.5.2 T0 代osa-miR399k-OX植株出现磷中毒表型第68-69页
            4.4.5.3 T1 代转基因植株磷吸收效率与转基因阳性检测共分离第69-70页
            4.4.5.4 不同磷浓度胁迫处理,转基因植株磷吸收效率高第70-72页
            4.4.5.5 miR399 靶基因的等位突变体表型第72-74页
        4.4.6 czh1731 突变体(03Z11CE42)与水稻株型第74-87页
            4.4.6.1 矮化丛生突变体的获得第74-76页
            4.4.6.2 突变体表型是由于T-DNA插入造成osa-miR156e表达量提高引起第76-78页
            4.4.6.3 超表达osa-miR156e和osa-miR156eA重现突变体表型第78-79页
            4.4.6.4 miR156e-OX植株的突变程度与osa-miR156e的剂量相关第79-81页
            4.4.6.5 超表达osa-miR156e影响MAX/RMS/D路径第81-82页
            4.4.6.6 UAS-osa-miR156e异位表达系统改造水稻株型第82-85页
            4.4.6.7 pTB1:miR156e改良水稻株型第85-87页
5 讨论第87-93页
    5.1 水稻突变体库概况第87页
    5.2 35S启动子甲基化的发现与利用第87-89页
    5.3 T-DNA在插入突变体中的激活标签功能第89页
    5.4 miR156 可能通过MAX/RMS/D路径影响水稻顶端优势和分蘖第89-90页
    5.5 miR156 可能与物种进化有关第90-91页
    5.6 miR156 可作为改良水稻株型的潜在工具第91-92页
    5.7 GAL4–UAS双元反式激活系统在杂交后代中不稳定第92页
    5.8 本研究后续工作的展望第92-93页
参考文献:第93-107页
附录1 引物序列第107-113页
附录2 国际水稻研究所水培营养配方第113-114页
附录3 部分实验的详细步骤及试剂配方第114-128页
附录4 作者简历第128-129页
致谢第129-130页

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