缩写名词表 | 第8-9页 |
中文摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-13页 |
1 文献综述 | 第14-38页 |
1.1 植物突变体库与功能基因组学 | 第14-26页 |
1.1.1 植物功能基因组学 | 第14-15页 |
1.1.2 植物功能基因组学的研究方法及技术 | 第15-23页 |
1.1.2.1 基于表达谱和高通量测序技术的基因功能研究 | 第15-16页 |
1.1.2.2 基于突变体库的基因功能研究 | 第16-21页 |
1.1.2.3 基于表达模式及表达量的基因功能研究 | 第21-23页 |
1.1.3 T-DNA插入位点侧翼序列分离方法 | 第23-25页 |
1.1.4 利用突变体库的两种研究策略 | 第25页 |
1.1.5 T-DNA插入突变体库大小计算 | 第25-26页 |
1.2 siRNA和miRNA | 第26-35页 |
1.2.1 siRNA | 第26-30页 |
1.2.1.1 siRNA的发现与加工过程 | 第26-27页 |
1.2.1.2 siRNA的放大效应机制 | 第27-28页 |
1.2.1.3 siRNA引起的转录后水平的基因沉默 | 第28页 |
1.2.1.4 转录水平的基因沉默 | 第28页 |
1.2.1.5 病毒诱导的基因沉默 | 第28-29页 |
1.2.1.6 cis-acting siRNA和trans-acting siRNA | 第29-30页 |
1.2.2 miRNA | 第30-35页 |
1.2.2.1 miRNA发现与加工过程 | 第30-33页 |
1.2.2.2 mi RNA-RISC对靶基因mRNA的抑制方式 | 第33页 |
1.2.2.3 miRNA分离克隆与表达量的检测方法 | 第33页 |
1.2.2.4 植物miRNA靶基因预测与鉴定 | 第33-34页 |
1.2.2.5 人工构建miRNAs(Artificial miRNAs,amiRNAs) | 第34页 |
1.2.2.6 miRNA功能 | 第34-35页 |
1.3 miR156与水稻株型 | 第35-38页 |
2 本研究的目的和意义 | 第38-39页 |
3 材料方法 | 第39-43页 |
3.1 植物材料和生长条件 | 第39页 |
3.2 突变体基因型判定与共分离检测 | 第39页 |
3.3 mi RNA超表达载体构建 | 第39-40页 |
3.4 Stem–loop RT-PCR检测miRNA的表达量 | 第40页 |
3.5 RT-PCR和qRT-PCR | 第40-41页 |
3.6 载体构建和遗传转化 | 第41页 |
3.7 GAL4–UAS双元反式激活系统 | 第41-42页 |
3.8 GUS与GFP表达检测 | 第42-43页 |
4 结果与分析 | 第43-87页 |
4.1 大型水稻T-DNA插入突变体库的构建 | 第43页 |
4.2 突变体的种植、筛选与鉴定 | 第43-61页 |
4.2.1 CZH0773(03Z11BC50)家系 | 第44-47页 |
4.2.1.1 czh0773M突变体表型 | 第44-45页 |
4.2.1.2 共分离检测 | 第45-46页 |
4.2.1.3 czh0773M突变体互补试验 | 第46-47页 |
4.2.2 CZH1731(03Z11CE42)家系 | 第47-48页 |
4.2.3 CZH1588(03Z11CA28)家系 | 第48-61页 |
4.2.3.1 czh1588M突变体的获得 | 第48-49页 |
4.2.3.2 共分离检测 | 第49-50页 |
4.2.3.3 其它相关实验 | 第50-54页 |
4.2.3.4 互补实验出现转空载体恢复表型的现象 | 第54-55页 |
4.2.3.5 35S启动子的增强与沉默效应造成突变表型的出现与消失 | 第55-58页 |
4.2.3.6 35S启动子造成载体上的GUS报告基因异常表达 | 第58-60页 |
4.2.3.7 发生甲基化的细胞内并非所有 35S启动子位点都被甲基化 | 第60-61页 |
4.2.3.8 35S启动子甲基化测序 | 第61页 |
4.3 小型miRNA超表达突变体库的构建 | 第61-62页 |
4.4 部分miRNA超表达后的表型 | 第62-87页 |
4.4.1 osa-miR319 超表达植株 | 第62页 |
4.4.2 osa-miR529 超表达植株 | 第62-64页 |
4.4.3 osa-miR167 超表达植株 | 第64-66页 |
4.4.4 osa-miR160 超表达植株 | 第66-68页 |
4.4.5 osa-miR399 超表达植株 | 第68-74页 |
4.4.5.1 osa-miR399k-OX植株的获得 | 第68页 |
4.4.5.2 T0 代osa-miR399k-OX植株出现磷中毒表型 | 第68-69页 |
4.4.5.3 T1 代转基因植株磷吸收效率与转基因阳性检测共分离 | 第69-70页 |
4.4.5.4 不同磷浓度胁迫处理,转基因植株磷吸收效率高 | 第70-72页 |
4.4.5.5 miR399 靶基因的等位突变体表型 | 第72-74页 |
4.4.6 czh1731 突变体(03Z11CE42)与水稻株型 | 第74-87页 |
4.4.6.1 矮化丛生突变体的获得 | 第74-76页 |
4.4.6.2 突变体表型是由于T-DNA插入造成osa-miR156e表达量提高引起 | 第76-78页 |
4.4.6.3 超表达osa-miR156e和osa-miR156eA重现突变体表型 | 第78-79页 |
4.4.6.4 miR156e-OX植株的突变程度与osa-miR156e的剂量相关 | 第79-81页 |
4.4.6.5 超表达osa-miR156e影响MAX/RMS/D路径 | 第81-82页 |
4.4.6.6 UAS-osa-miR156e异位表达系统改造水稻株型 | 第82-85页 |
4.4.6.7 pTB1:miR156e改良水稻株型 | 第85-87页 |
5 讨论 | 第87-93页 |
5.1 水稻突变体库概况 | 第87页 |
5.2 35S启动子甲基化的发现与利用 | 第87-89页 |
5.3 T-DNA在插入突变体中的激活标签功能 | 第89页 |
5.4 miR156 可能通过MAX/RMS/D路径影响水稻顶端优势和分蘖 | 第89-90页 |
5.5 miR156 可能与物种进化有关 | 第90-91页 |
5.6 miR156 可作为改良水稻株型的潜在工具 | 第91-92页 |
5.7 GAL4–UAS双元反式激活系统在杂交后代中不稳定 | 第92页 |
5.8 本研究后续工作的展望 | 第92-93页 |
参考文献: | 第93-107页 |
附录1 引物序列 | 第107-113页 |
附录2 国际水稻研究所水培营养配方 | 第113-114页 |
附录3 部分实验的详细步骤及试剂配方 | 第114-128页 |
附录4 作者简历 | 第128-129页 |
致谢 | 第129-130页 |