| 摘要 | 第8-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 缩写词表 | 第18-19页 |
| 第一章 研究背景 | 第19-37页 |
| 1.1 纤维素资源的开发利用 | 第19-20页 |
| 1.2 纤维素的结构 | 第20-22页 |
| 1.3 纤维素的微生物降解 | 第22-30页 |
| 1.3.1 纤维素降解微生物 | 第22-24页 |
| 1.3.2 纤维素降解机制 | 第24-28页 |
| 1.3.3 纤维素吸附 | 第28-30页 |
| 1.4 纤维素降解酶 | 第30-32页 |
| 1.4.1 持续降解的纤维素酶 | 第30-31页 |
| 1.4.2 内切纤维素酶 | 第31页 |
| 1.4.3 β-葡萄糖苷酶 | 第31-32页 |
| 1.5 Cytophaga hutchinsonii的研究背景 | 第32-34页 |
| 1.5.1 C. hutchinsonii的特征 | 第32-33页 |
| 1.5.2 C. hutchinsonii的研究进展 | 第33-34页 |
| 1.6 论文的立题依据和思路 | 第34-37页 |
| 第二章 持续性内切纤维素酶CHU_2103的研究 | 第37-65页 |
| 2.1 材料和方法 | 第37-51页 |
| 2.1.1 菌种及培养条件 | 第37-38页 |
| 2.1.2 培养基和缓冲液 | 第38页 |
| 2.1.3 试剂与仪器 | 第38-39页 |
| 2.1.4 实验中所用引物和质粒 | 第39-41页 |
| 2.1.5 E. coli感受态的制备以及热激转化 | 第41-42页 |
| 2.1.6 C. hutchinsonii感受态细胞的制备及电击转化 | 第42-43页 |
| 2.1.7 常规分子生物学操作及反应体系 | 第43-44页 |
| 2.1.8 再生无定形纤维素(RAC)的制备 | 第44-45页 |
| 2.1.9 蛋白序列分析 | 第45页 |
| 2.1.10 目的蛋白的诱导表达及纯化 | 第45-46页 |
| 2.1.11 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第46-47页 |
| 2.1.12 蛋白质浓度测定(考马斯亮蓝染色法) | 第47-48页 |
| 2.1.13 DNS(3,5-二硝基水杨酸)试剂的配制 | 第48页 |
| 2.1.14 纤维素酶活力测定 | 第48-49页 |
| 2.1.15 纤维素酶降解不溶性纤维素的持续性测定 | 第49-50页 |
| 2.1.16 高效液相层析与薄层层析 | 第50页 |
| 2.1.17 纤维素吸附实验 | 第50页 |
| 2.1.18 菌体细胞表面以及细胞裂解液内切纤维素酶活性的测定 | 第50-51页 |
| 2.2 结果 | 第51-61页 |
| 2.2.1 CHU_2103序列分析 | 第51-53页 |
| 2.2.2 CHU_2103的异源表达及纯化 | 第53页 |
| 2.2.3 CHU_2103的性质 | 第53-57页 |
| 2.2.4 CHU 2103降解不溶性纤维素的持续性 | 第57-58页 |
| 2.2.5 CHU 2103氨基酸定点突变体的构建及纯化 | 第58页 |
| 2.2.6 CHU_2103氨基酸定点突变体对纤维素的降解 | 第58-59页 |
| 2.2.7 CHU_2103及其突变体对纤维素的吸附作用 | 第59-60页 |
| 2.2.8 C. hutchinsonii中基因chu_2103的敲除 | 第60页 |
| 2.2.9 C. hutchinsonii及CHin2103菌体表面及细胞裂解液纤维素酶活测定 | 第60-61页 |
| 2.3 讨论 | 第61-63页 |
| 2.4 小结 | 第63-65页 |
| 第三章 Ca~(2+)依赖持续性内切纤维素酶CHU_1280的研究 | 第65-81页 |
| 3.1 材料和方法 | 第65-68页 |
| 3.1.1 菌种及培养条件 | 第65-66页 |
| 3.1.2 培养基与缓冲液 | 第66页 |
| 3.1.3 试剂与仪器 | 第66-67页 |
| 3.1.4 蛋白序列分析 | 第67页 |
| 3.1.5 CHU_1280表达菌株构建 | 第67页 |
| 3.1.6 重组CHU_1280的诱导表达及纯化 | 第67页 |
| 3.1.7 纤维素酶活性测定 | 第67页 |
| 3.1.8 Ca~(2+)对CHU_1280活性影响测定 | 第67-68页 |
| 3.1.9 CHU_1280最适反应温度及最适反应pH的测定 | 第68页 |
| 3.1.10 CHU_1280降解RAC产生可溶性及不溶性还原端比例的测定 | 第68页 |
| 3.1.11 薄层层析 | 第68页 |
| 3.1.12 差示扫描量热法测定CHU_1280变性温度 | 第68页 |
| 3.2 结果 | 第68-77页 |
| 3.2.1 CHU_1280序列分析 | 第68-69页 |
| 3.2.2 重组CHU_1280的诱导表达与纯化 | 第69-70页 |
| 3.2.3 Ca~(2+)对CHU_1280酶活性的影响 | 第70-71页 |
| 3.2.4 CHU_1280的性质 | 第71-75页 |
| 3.2.5 Ca~(2+)对CHU_1280稳定性影响 | 第75-76页 |
| 3.2.6 Ca~(2+)对CHU_1280吸附纤维素能力的影响 | 第76-77页 |
| 3.3 讨论 | 第77-78页 |
| 3.4 小结 | 第78-81页 |
| 第四章 纤维寡糖酶CHU_2268的研究 | 第81-97页 |
| 4.1 材料和方法 | 第81-85页 |
| 4.1.1 菌种及培养条件 | 第81-82页 |
| 4.1.2 培养基与缓冲液 | 第82页 |
| 4.1.3 试剂与仪器 | 第82-83页 |
| 4.1.4 蛋白序列分析软件 | 第83页 |
| 4.1.5 CHU_2268表达菌株的构建 | 第83页 |
| 4.1.6 重组CHU-2268的诱导表达及纯化 | 第83-84页 |
| 4.1.7 β-葡萄糖苷酶活性测定 | 第84页 |
| 4.1.8 CHU_2268最适反应温度及最适反应pH | 第84页 |
| 4.1.9 CHU_2268水解pNPG与pNPC产生pNP曲线测定 | 第84页 |
| 4.1.10 CHU_2268与内切纤维素酶的协同性 | 第84-85页 |
| 4.1.11 葡萄糖对CHU_2268活性的影响 | 第85页 |
| 4.1.12 离子色谱 | 第85页 |
| 4.2 结果 | 第85-93页 |
| 4.2.1 CHU_2268序列分析 | 第85-86页 |
| 4.2.2 CHU_2268的诱导表达及纯化 | 第86页 |
| 4.2.3 CHU 2268性质 | 第86-92页 |
| 4.2.4 CHU_2268与内切纤维素酶的协同作用 | 第92-93页 |
| 4.3 讨论 | 第93-94页 |
| 4.4 小结 | 第94-97页 |
| 第五章 C. hutchinsonii膜蛋白复合体的初步研究 | 第97-111页 |
| 5.1 材料和方法 | 第98-104页 |
| 5.1.1 菌种及培养条件 | 第98页 |
| 5.1.2 培养基和缓冲液 | 第98页 |
| 5.1.3 试剂与仪器 | 第98-99页 |
| 5.1.4 C hutchinsonii膜蛋白提取 | 第99页 |
| 5.1.5 BN-PAGE | 第99-101页 |
| 5.1.6 β-葡萄糖苷酶以及内切纤维素酶活性电泳 | 第101-102页 |
| 5.1.7 第二向Tricine- SDS-PAGE | 第102-103页 |
| 5.1.8 蛋白质谱鉴定 | 第103-104页 |
| 5.2 结果 | 第104-109页 |
| 5.2.1 C. hutchinsonii膜蛋白BN-PAGE电泳以及质谱鉴定 | 第104-105页 |
| 5.2.2 C. hutchinsonii膜蛋白BN-PAGE电泳以及β-葡萄糖苷酶和纤维素内切酶活性染色 | 第105-106页 |
| 5.2.3 C. hutchinsonii β-葡萄糖苷酶活性条带SDS-PAGE | 第106-107页 |
| 5.2.4 C. hutchinsonii膜蛋白第二向SDS-PAGE电泳 | 第107-109页 |
| 5.3 讨论 | 第109页 |
| 5.4 小结 | 第109-111页 |
| 全文总结及展望 | 第111-115页 |
| 参考文献 | 第115-125页 |
| 在读期间发表的学术论文及申请专利 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 附件 | 第128页 |
